制种技术 消毒灭菌及无菌操作技术.pptx

制种技术——消毒灭菌及无菌操作技术 概念及意义无菌操作技术 的内容 概念及意义在菌种的分离、接种及纯培养时，采取措施防止被其它微生物污染的操作技术叫无菌操作。灭菌---采取措施杀灭物体上一切微生物。消毒---采取措施杀灭物体上病原微生物。防腐---采取措施抑制、防止微生物生长繁殖。 无菌操作技术的作用在操作和培养过程中防止一切其它微生物侵入、感染 ；创造无菌的培养环境；作用：无菌操作技术是食药用菌实验的基本技术，是保证食用菌实验准确和顺利完成的重要技术；在液体发酵工业中，无菌操作也是保证发酵顺利进行的重要技术。 创造无菌的环境--培养菌种提供密闭的培养容器 实验室中常用经包扎过的试管、三角瓶、培养皿等培养容器的灭菌实验室中常采用干热空气灭菌法对玻璃器皿进行灭菌 --生产菌种培养基--生产中常采用高温蒸汽进行灭菌（常压或高压）；环境、用具--用化学消毒剂进行消毒、灭菌。培养基的灭菌 创造无菌的培养环境 在操作和培养过程中防止一切其它微生物的侵入 保证操作环境无菌 保证操作台面无菌保证操作工具、器皿无菌保证操作人员无菌保证严格按操作规程进行操作 灭菌方法 加热灭菌 辐射灭菌 过滤除菌 干热灭菌法 湿热灭菌法 灼烧法 干烤灭菌 巴氏消毒法 煮沸消毒法 间歇灭菌法 常规加压灭菌法 连续加压灭菌法 干燥 加热（高温）灭菌 原理：微生物细胞的蛋白质、核酸等大分子物质对高温非常敏感当环境温度超过微生物的最高生长温度，将会引起微生物死亡应用范围：最广的一类灭菌或消毒的方法 湿热灭菌法 煮沸消毒法常压流通蒸汽消毒法间歇灭菌法高压蒸汽灭菌法巴氏消毒法动物微生物课程组 1 干热灭菌(dry heat sterilization ) 焚烧灭菌法：常用于废弃物、病畜尸体等处理。 烧灼灭菌法：是直接火焰灭菌，如接种环、试管口等的灭菌。 烘烤灭菌法：利用干燥烘箱以热空气进行灭菌的一种方法。适用于高温下不变质、不损坏等物品的灭菌，如玻璃器皿、金属制品等。由于热空气穿透力较低，因此需加热到160℃维持1-2小时才能达到灭菌目的。动物微生物课程组 灼烧法直接在火焰灼烧灭菌。特点：最简单、最彻底的加热灭菌方法，对被灭菌物品破坏极大应用范围：接种工具金属小工具试管口的灭菌 烘烤灭菌在电热干燥箱内（见图）利用热空气灭菌。一般箱内空气升温到150~170℃，维持1~2h注意：电热干燥箱内温度不要超过180℃，以防棉塞和包装纸等烤焦而燃烧应用范围：玻璃器皿、陶瓷制品等 常压灭菌法此法用于大规模生产的培养基(料）灭菌让培养基(料）在常压灭菌锅或灶中连续不断地进行加热、维持，培养基一般加热至100℃维持8～16h。 常压蒸汽灭菌法此法用于大规模生产的培养基(料）灭菌 常压蒸汽灭菌法--大规模 常压灭菌100℃灭菌10-16h左右→再闷12h要求旺火攻头、控中、保尾 返回本节 （二）原种、栽培种培养基的高压灭菌高压灭菌1.5kg/cm2（0.15Mpa、128.1℃）灭菌1~2h 返回本节 辐射灭菌概念：是利用电磁辐射产生的电磁波杀死大多数物质上的微生物的一种有效方法用于灭菌的电磁波红外线，效果差可见光，效果差X射线，电离杀菌γ射线，电离杀菌微波，较常用紫外线，最常用 紫外线杀菌原理：当微生物被照射时，细胞的DNA吸收能量，形成胸腺嘧啶二聚体，此时腺嘌呤无法正确配对，从而干扰DNA的复制和蛋白质的合成，造成微生物的死亡杀菌波长257nm左右杀菌特点：穿透力很弱，易被固形物吸收，不能透过普通玻璃和纸张。 紫外线杀菌特性使用范围：物体表面消毒和空气、水的消毒。广泛应用于微生物化验室、医院、公共场所的空气消毒使用剂量：1W/m3注意事项：1.防止紫外线对人体的直接照射，以免损伤皮肤和眼结膜 2. 提前30分钟开灯照射。 紫外线：136-400nm杀菌机理：波长210～328nm的紫外线具有杀菌作用265nm者杀菌力最强。干扰DNA的复制与转录紫外线穿透力较弱室内空气和不耐热物品的表面消毒应用范围：特点：影响因素：紫外线的波长、距离、照射时间；微生物的种类（G-、G+、芽孢、病毒）、数量、环境温度和湿度等 微波杀菌微波是指频率在300MHz到300 000Mhz的电磁波杀菌原理：微波的杀菌作用主要是微波的热效应造成的。微生物在微波电磁场的作用下，吸收微波的能量产生热效应，同时，微波造成分子加速运动使细胞内部受到损害，从而导致微生物死亡特点：加热均匀、热能利用率高、渗透能力强、加热时间短应用范围：进行培养基灭菌、酒精消毒 无菌室--里面操作 超净台上操作 环境消毒--无菌化处理 超净台 接种箱--里面操作 保证操作人员无菌不感染 接种操作无菌操作：火焰附近（酒精灯、燃气灯）进行 接种操作 思考题1. 什么是消毒、灭菌和防腐？2.食药用菌培养基（料）