第十一章-上海亚研电子科技有限公司.ppt

例：精密吸取B12注射液2.50mL，加水稀释至10.00mL；另配制对照液，精密称定对照品25.00mg，加水稀释至1000mL。在361nm处，用1cm吸收池，分别测定吸光度为0.508和0.518，求B12注射液注射液的浓度以及标示量的百分含量（该B12注射液的标示量为100μg/mL） 第六十二页，共八十九页。 紫外-可见分光光度法可用于弱酸（碱）离解常数和配合平衡常数及配合物组成的测定。 一元弱酸的离解常数的测定： 原理：配制分析浓度为C的弱酸溶液，分别调节pH为酸性、碱性及二者之间，一定波长下测定二份溶液吸光度值。 酸性溶液：AHA=εHAC 碱性溶液：A A-=εA-C 二者之间溶液：A = AHA+ A A- =εHA[HA] +εA-[A-] 第六十三页，共八十九页。 第三十页，共八十九页。 入射光的谱带宽度严重影响吸光系数和吸收光谱形状 注意： 选择较纯单色光（Δλ↓，单色性↑） 选λmax作为测定波长（ΔE↓，S↑且成线性） 第三十一页，共八十九页。 2、杂散光（stray light）：一些不在谱带宽度范围内的与所需波长相隔较远的光。 杂散光来源：仪器本身缺陷；光学元件污染造成。 杂散光可使吸收光谱变形，吸光度变值。 ChP（2005）对杂散光的检查： 方法：可按下表所列的试剂和浓度，配制成水溶液，置1cm石英吸收池中，在规定的波长处测定透光率，应符合表中的规定。 试剂 浓度/%（g/ml） 测定用波长/nm 透光率/% 碘化钠 1.00 220 0.8 亚硝酸钠 5.00 340 0.8 第三十二页，共八十九页。 3、散射光和反射光： 吸光质点对入射光有散射作用。 入射光在吸收池内外界面之间通过时有反射作用。 反射光和散色光均是入射光谱带宽度内的光，直接对 T 产生影响。 散射和反射使T↓，A↑，吸收光谱变形。 消除：一般可用空白对比校正消除 4、非平行光： 使光程↑，A↑，吸收光谱变形。 第三十三页，共八十九页。 （三）透光率测量误差 透光率测量误差ΔT是测量中的随机误差，来自仪器的噪音（noise）。 一类与光讯号无关，称暗噪音（dark noise）。 一类随光讯号强弱而变化，称散粒噪音（signal shot noise）。 第三十四页，共八十九页。 1、暗噪音——与检测器和放大电路不确切性有关 与光讯号无关 其强弱取决于各种电子元件和线路结构的质量、工作状态以及环境条件等。 第三十五页，共八十九页。 2、讯号噪音：每一单位时间中电子迁移数量是不相等的，而是在某一均值周围的随机数，形成测量光强时的不确定性。 表明测量误差较小的范围 一直可延至较高吸光度区， 对测定有利。 第三十六页，共八十九页。 第二节 紫外-可见分光光度计 一、主要部件 1、光源 要求：强度足够且稳定、连续光谱且发光面积小。 （1）钨灯或卤钨灯：350nm可见区光源。 卤钨灯灯泡内含碘和溴的低压蒸气，钨丝寿命↑，发光强度高。 （2）氢灯或氘灯：150-400nm的连续光谱，用于紫外光区。 氘灯发光强度和使用寿命较好。 第三十七页，共八十九页。 2、单色器：狭缝、准直镜、色散元件 色散元件：棱镜、光栅 光栅：铝作反射面，在平滑玻璃表面上，每毫米刻槽600-1200条。 准直镜：镀铝的抛物柱面反射镜。 狭缝：宽度适当，以尝试减少狭缝宽度，试样吸光度不再改变时的宽度为宜。 3、吸收池 玻璃：可见光区 石英：紫外、可见光区 第三十八页，共八十九页。 4、检测器 光电效应检测器，将接收到的辐射功率变成电流的转换器。 （1）光电池 硒光电池：可见光区 硅光电池：紫外、可见光区 原理：为一种光敏半导体，当光照时产生光电流，一定范围内光电流大小与照射光强成正比，直接用微电流计测量。 （2）光电管 原理：由一个阳极和一个光敏阴极组成的真空（或充少量惰性气体）二极管，阴极表面镀有碱金属或碱金属氧化物等光敏材料，当它被有足够能量的光照射时，能够发射出电子。当在两极间有电位差时，发射出的电子流向阳极而产生电流，电流大小取决于照射光的强度。 例：紫敏光电管、红敏光电管 第三十九页，共八十九页。 （3）光电倍增管 原理：光敏金属的阴极和阳极之间有几个倍增级（一般是九个）。 （4）光二极管阵列检测器 原理：在晶体硅上紧密排列一系列光二极管，每一个二极管相当于一个单色仪的出口狭缝。在极短时间，可获得全光光谱。 5、讯号处理与显示器 由电表指示、数字显示、荧光屏显示、结果打印、曲