膜片钳常见问题汇总（人人都会膜片钳）.doc

人人都会膜片钳 膜片钳常见问题汇总 目录 TOC \o 1-3 \h \z \u 膜片钳系统 4 做膜片钳之前 4 什么是膜片钳？Patch clamp 4 信号流 4 重要概念： 4 膜电位： 4 参考电极： 5 记录电极： 5 电极参数： 5 电极参数对patch的影响： 5 怎样得到需要的电极参数？ 6 膜被动反应参数： 6 细胞外液的配置要注意什么？ 6 电极内液配置有什么要求？ 7 没有渗透压仪，怎么计算渗透压？ 7 封接时需要给正压吗？ 7 为什么封接维持不了很长时间？ 7 膜片钳放大器到底记录哪些参数？ 8 快电容与慢电容 8 Mode： 8 Membrane test测试脉冲怎样设置？ 9 钳制电位是什么？如何设置？ 10 达不到G欧封接的原因 10 脑片细胞破膜困难怎么办？ 10 什么是protocol? 什么是Ramp? 什么是step? 10 记录时发现Overload信号灯闪，为什么？ 10 解决噪音与基线问题的通用招数： 10 基线怎么老是上下跳动？ 11 滤波频率，采样频率的应该如何设置？ 11 Whole-cell 问题及解答 12 全细胞记录一般使用什么样的电极内液？ 12 如何确定已经破膜？ 12 是否每次一定要做电容消除、串连电阻补偿、漏减、和液接电位矫正？ 12 什么是尾电流，他主要反映通道的什么特性及用在那些方面？ 13 实验记录应该保留那些参数？ 13 记录到的电流幅度差异大怎么办？ 13 为什么我记录到的电流越来越小？ 13 什么是漏电流，为什么要做Leak subtraction？ 13 Cell-attached 单通道记录问题及解答 14 其他记录模式常见问题及解答 14 数据分析 14 如何分析突触放电活动数据？ 14 如何选用数码滤波类型？ 14 细胞类型 15 急性脑切片 15 要保证细胞活性需要注意什么问题？ 15 脑切片一般切多厚合适？ 15 如何判断脑片细胞的好坏？ 15 ACSF的配方中的Mg离子，有的用的MgSO4，有的用的MgCl2，他们有什么区别？ 15 培养脑切片 15 急性分离神经元 15 分离大鼠海马神经元的方法 15 培养神经元 16 为什么我们用培养的大鼠海马神经元记录NMDA电流，总是会出现电流的衰减? 16 急性分离细胞 16 怎样用离体灌流的方法急性分离大鼠心肌细胞？ 16 如何对心肌细胞悬液进行复钙？ 17 心肌细胞急性分离液体一般配方： 17 分大鼠心肌细胞，液体充氧是用的是纯氧、还是95％O2和5％CO2的混合气？ 17 心肌细胞急性分离是用什么酶，消化多少分钟比较好？ 17 如何通过观察细胞状态调整酶浓度？ 17 如何判断心肌细胞的状态？实验室需要持续灌流吗？ 18 用消化酶灌流心脏后整个心脏迅速变白,不知道是什么原因？ 18 分离平滑肌细胞需要注意什么？ 18 如何分离动脉平滑肌细胞？ 18 分离动脉平滑肌细胞用什么酶？怎么判断消化时间是否合适？ 18 平滑肌细胞patch要注意什么？ 18 急性分离的DRG要消化到什么程度才合适，进行全细胞膜片钳？ 19 细胞系 19 HeK293细胞转染多长时间合适？ 19 为什么我记录的细胞没有Ca电流呢？ 19 我记录的细胞非常扁平，不好patch怎么办？ 19 离子通道问题 20 离子通道的种类： 20 什么是离子通道的激活，失活，去激活？ 20 如何绘制离子通道的激活曲线？ 20 如何绘制离子通道的I-V曲线？ 20 什么叫整流？内向整流、外向整流的区别有什么区别？ 20 如何绘制离子通道的失活曲线？ 21 钾离子通道 21 神经元钾通道电流的电极内液和细胞外液配方 21 如何记录及确认K ATP 电流？ 21 记录KATP电流内液加不加Na2ATP的问题？ 21 钠离子通道 21 钙离子通道 21 外液中用Ba2+取代Ca2+对不同的 钙电流会有什么不同的影响？ 21 全细胞记录不到Ca2+电流,好像还是K+电流,都是正向电流 22 电极内液和细胞外液都用了TEA-Cl，仍然没有记到Ca电流，是什么原 因？ 22 记录L型Ca电流，阻断Na电流应该加TTX吧?