药物分析培训-高效液相色谱技术.pdf

高效液相色谱技术 李振兴 山东药品食品职业学院 2022.12 1 高效液相色谱法概述 2 色谱分离机制 3 HPLC的分类及分离机制 一、高效液相色谱法概述 高效液相色谱法是继气相色谱之后 ，70年代初期发展起来 的一种以液体做流动相的新色谱技术。 高效液相色谱是在气相色谱和经典色谱的基础上发展起来 的。现代液相色谱和经典液相色谱没有本质的区别。不同点仅 仅是现代液相色谱比经典液相色谱有较高的效率 和实现了自动 化 操作。 一、高效液相色谱法概述 高效液相色谱 经典色谱 一、高效液相色谱法概述 高效液相色谱与经典液相色谱方法的比较 高压 液相色谱以液体作为流动相 （称为载液），液体流经色谱柱时 ，受 到的阻力较大 ，为了能迅速地通过色谱柱 ，必须对载液施加高压。在 现代液体色谱 中供 液压力和进样压力都很高 ，一般 可达到 150 ～ 2 300kg ／cm2，甚至可达700k ／cm 以上。 高速 ：HPLC采用高压输液设备 ，流速大增加 ，分析速度极快 ，只需数分 钟 ；而经典方法靠重力加料 ，完成一次分析需时数小时。 高效 ：填充物颗粒极细且规则 ，固定相涂渍均匀、传质阻力小 ，因而柱 效很高。可以在数分钟内完成数百种物质的分离。 高灵敏度 ：检测器灵敏度极高 ：UV—— 10-9g, 荧光检测器—— 10-11g。 一、高效液相色谱法概述 综上所述 ，高效液相色谱法具有高柱效、高选择性、分析 速度快、灵敏度高、重复性好、应用范围广等优点。该法已成 为现代分析技术的重要手段之一 ，目前在化学、化工、医药、 生化、环保、农业等科学领域获得广泛的应用。 二、色谱分离机制 热力学理论 ：塔板理论——平衡理论 动力学理论 ：速率理论——Van Deemter方程 色谱理论需要解决的问题 ：色谱分离过程的热力学和动力学问题。影响分 离及柱效的因素与提高柱效的途径 ，柱效与分离度的评价指标及其关系。 组分保留时间为何不同？色谱峰为何变宽？ 组分保留时间 ：色谱过程的热力学因素控制 ； 色谱峰变宽 ：色谱过程的动力学因素控制 ； 两种色谱理论 ：塔板理论和速率理论 二、色谱分离机制 （一）塔板理论 半经验理 ，将色谱分离过程比拟作蒸馏过程 ，将连续的色谱分离过程 分割成多次的平衡过程的重复 （类似于蒸馏塔塔板上的平衡过程）。 塔板理论的四个假设 ： (1)在每一个平衡过程间隔内，平衡可以迅速达到 ； (2)将载气看作成脉动 （间歇）过程 ；每次进气一个塔板体积。 (3)样品和载气均加在第0号塔板上 ，且忽略样品沿柱方向的纵向扩散。 (4)分配系数在各塔板上是常数。 二、色谱分离机制 色谱柱长 ：L 理论塔板高度H 为使组分在柱 内两相间达到一次分配平 衡所需要的柱长。 理论塔板数n 组分流过色谱柱时，在两相间进行平衡分配 的总次数。 则三者的关系为 ： n L / H 理论塔板数与色谱参数之间的关系为 ： 保留时间包含死时间，在死时间内不参与分配! 二、色谱分离机制 1.有效塔板数和有效塔板高度 ● 单位柱长的塔板数越多 ，表明柱效越高。 ●用不同物质计算可得到不同的理论塔板数。 ●由于组分在tM时间内不参与柱 内分配。理论塔板数和理论塔板 高度不能真实地反映柱效 ，需引入有效塔板数和有效塔板高度 ：