SOP-WSW-016《BacT ALERT 3D血培养仪性能验证实验标准操作规程》.pdf

1．目的 针对湖南省肿瘤医院临床微生物室所用的BacT/ALERT3D血培养仪，评估血培养仪 能否用于培养临床常见需氧菌（包括酵母菌、苛养菌等）以及仪器（自动化系统） 能否及时检测出血液中的大部分病原菌。 2．验证仪器 仪器名称： BacT/ALERT3D血培养仪。 仪器生产厂家：法国生物梅里埃生物有限公司。 试剂：需氧瓶和厌氧瓶。 3．性能验证的检测时机 3.1方法/系统首次在实验室使用时 3.2EQA/PT结果未通过时，采取纠正措施后 3.3检测系统发生改变时 3.4检测系统发生重大故障时 3.5检测系统改变位置时 4．细菌选择 需氧瓶：大肠埃希菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC29213、金黄色葡萄球菌 ATCC25923、铜绿假单胞菌 ATCC27853、粪肠球菌 ATCC29212、铅黄肠球菌 ATCC700327 ATCC700324 A ATCC19615 B 、产酸克雷伯菌 、 群链球菌 、 群链球菌 ATCC12401、流感嗜血杆菌ATCC49247、肺炎链球菌ATCC49619、白色念珠菌 ATCC14053、近平滑念珠菌ATCC22019、嗜水气单胞菌、甲型副伤寒沙门菌 厌氧瓶：大肠埃希菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC25923、肺炎链球菌 ATCC49619、脆弱拟杆菌、产气荚膜梭菌 5．适用人员 经岗位授权的技术人员。按照检测系统的检测程序、质量控制程序和维护保养程序等进 行操作。 6．验证方案 验证应覆盖临床常见微生物，需氧成人血培养瓶验证菌株应包括需氧/兼性厌氧革 兰阳性菌、需氧/兼性厌氧革兰阴性菌、苛养菌（如：流感嗜血杆菌和肺炎链球菌等） 和真菌。厌氧血培养瓶验证菌株应包括兼性厌氧革兰阳性菌、兼性厌氧革兰阴性菌、专 性厌氧菌，其他特殊用途血培养瓶参照厂家要求选择合适类型菌株进行验证。每种类型 至少１株，总体不少于20株。应尽可能使用真实患者的临床分离菌株（性能验证用临 床留样菌株宜经质谱或DNA序列分析确认）。对于特殊、苛养菌可使用标准菌株或质控 菌株。某些特殊菌株需要在培养瓶中加入无菌、未使用抗生素的厂家推荐血液标本，如 不加可能不生长，如流感嗜血杆菌。验证不少于20种细菌，各细菌分别共检测1次。 7.具体操作方法 7.1需氧细菌的接种评估步骤 7.1.1转质控菌株，分纯划线并培养24小时. 7.1.2 如果是平板上的菌落表现为纯生长,将菌落转接到新鲜的固体培养基上并培养24 小时. 7.1.3挑取三到五个单菌落用生理盐水配制成0.5个麦氏浊度的菌悬液.这时该细菌 的浓 度大约为10 CFU/ml.8 7.1.4将3个无菌试管标记为:1,2,3. 7.1.5无菌操作取9.9毫升生理盐水加入1,2号管中. 7.1.6无菌操作取9.75毫升生理盐水加入3号管中. 7.1.7无菌操作取在1号管中加入0.1毫升的0.5麦氏浓度的菌悬液加入1号管中并混匀. 配制了浓度约为106CFU/ml的菌悬液. 7.1.8无菌操作取0.1毫升1号管菌悬液加入到2号管中并混匀.配制了浓度约为 104CFU/ml的菌悬液. 7.1.9无菌操作取0.25毫升从2号管菌悬液加入到3号管中并混匀.配制了浓度约为250 CFU/ml的菌悬液. 7.1.10移除培养瓶翻盖并使用无菌酒精球擦拭BacT/ALERT培养瓶顶部. 7.1.11将所用的菌株信息标记在BacT/ALERT血培养瓶上. 7.1.12为了模仿血培养标本,分别无菌操作往FA\FN瓶加入10ml的无菌人血，PF瓶无菌 操作加入4ml无菌人血. 7.1.13在3个培养瓶中分别无菌操作加入来自3号管（步骤11）0.5毫升菌悬液.这时细 菌浓度约为125CFU/瓶.培养瓶在加入血液后应该在60分钟内接种菌悬液. 7.1.14阴性对照瓶中无菌操作加入10毫升无菌血液. 7.1.15将接种后的培养瓶装载入BacT/ALERT中,培养5天或直至仪器报阳. 7.1.16为了对加入瓶中的CFU进行计数.取3号管中0.1毫升菌悬液接种到合适的平板上. 使用无菌的细胞涂布器将菌悬液均匀的涂抹在培养基表面.接种后的平板放入合适的条 件下培养.注意: 由于配制不同