酸奶微生物检验.doc

《酸奶卫生标准》 编号：GB19302—2010 一、 准备内容： 1、无菌器材准备表： 仪器名称 数量 平板培养皿 12 1ml移液管 5 10ml移液管 1 玻璃棒 1 试管 25 烧杯 3 锥形瓶 3 2、培养基、试剂准备表： 名称 体积（ml） BPW 225 LST 100 BGLB 100 氯化钠肉汤 225 B-P琼脂平板 50 平板计数琼脂培养基 150 生理盐水 225、100 备注： 无菌生理盐水 氯化钠2.5g蒸馏水300ml 平板计数琼脂 有现成的培养基，直接称取即可，配制  120ml 月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤 胰蛋白胨或胰酪胨2.0g 氯化钠0.5g 乳糖0.5g 磷酸氢二钾（K2HPO4）0.275g 磷酸二氢钾（KH2PO4）0.275g 月桂基硫酸钠0.01g 蒸馏水100mL 将各成分加入蒸馏水中，搅混平均，静置约 15min。  10min，煮沸溶解，调治  pH，高压灭菌  121℃， 煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤 蛋白胨1g 乳糖1.0g 牛胆粉（oxgall或oxbile）溶液  20mL %煌绿水溶液  mL 蒸馏水  80mL pH± A.2.2制法 将蛋白胨、乳糖溶于约50mL蒸馏水中，加入牛胆粉溶液20mL（将2.0g脱水牛胆粉溶于20mL蒸馏水中，调治pH至～），用蒸馏水稀释到975mL，调治pH，再加入%煌绿水溶液mL，用蒸馏水补足到100mL，用棉花过滤后，分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10mL。121℃高压灭菌15min。 %氯化钠肉汤 蛋白胨2.25g 牛肉膏1.125g 氯化钠16.875g 蒸馏水225mL pH 将上述成分加热溶解，调治pH，分装，每瓶225mL，121℃高压灭菌15min。 Baird－Parker琼脂平板 胰蛋白胨0.5g 牛肉膏0.25g 酵母膏0.05g 丙酮酸钠0.5g 甘氨酸0.6g 氯化锂（LiCl·6H2O）0.25g 琼脂1.0g 蒸馏水 pH± 增菌剂的配法 30%卵黄盐水50mL 与经过除菌过滤的1%亚碲酸钾溶液10mL 混淆，保留于冰箱内。 制法 将各成分加到蒸馏水中， 加热煮沸至完好溶解， 调治pH。121℃高压灭菌15min。临用时加 热溶化琼脂，冷至50 ℃，每95mL加入预热至50℃的卵黄亚碲酸钾增菌剂 5mL摇匀后倾 注平板。培养基应是致密不透明的。使用前在冰箱积蓄不得高出 48h。 二、 指标 表3微生物限量 项目 采样方案a及限量（若非制定，均以CFU/g或CFU/ml表示） 检测方法 n c m M 菌落总数 5 2 10000 100000 大肠菌群 5 2 10 100 MPN计数法 沙门氏菌 5 0 0/25g(ml) - 金黄色葡萄 5 1 10 100 球菌 定性查验 霉菌≤ 90 A：样品的分析及办理按和履行。 B：不合用于以发酵稀奶油为原料的产品。 表4乳酸菌数 项目 限量[CFU/g(mL)] 查验方法 乳酸菌数a≥ 1×106 GB 发酵后经热办理的产品对乳酸菌数不作要求。 三、 样品根源： 四、 时间安排表 菌落总数 大肠杆菌 霉菌和酵 金黄色葡 乳酸菌 母菌 沙门氏菌 萄球菌 无菌器材 无菌器材 第1天 准备 准备 配置PCA 配置LST 配置样液 接种LST 第2天 配置 制平板 BGLB 察看LST 培养 产气情 第3天 况，有产 （36℃） 气的接种 BGLB 第4天 菌落计数 察看 BGLB 第5天 查MPN 报告 表 报告 五、 样品配置及器材准备  无菌器材 无菌器材 准备 准备 配置孟加 配置样液 拉红 划线接种 配置样品 到Baird 液 －Parker 制平板 氏培养基 和血平板 培养 (28℃) 革兰氏染 色镜检 菌落计数 报告报告  无菌器材 无菌器材 配置 准备 MRS平 BPW 板 配置样液 制BS和 XLD平 板 划线接种 到BS和 XLD平 板 察看 XLD平 板 察看BS 平板 无菌器材 培养皿 试管 菌落总数 9 2 移液管 大肠菌数 — 10 1ml*3/10ml*1; 锥形瓶 霉菌和酵母菌 9 2 500ml*1/250ml*1; 烧杯*1 金黄色葡萄菌 属  样品液 稀释度配置 12325g(ml)样 品+%的生 123 理盐水 123 沙门氏菌 乳酸菌 六、实验内容 （1）菌落总数 操作步骤 1、样品的稀释 液体样品：称取25g样品置盛有225mL生理盐水的无菌锥形瓶，摇匀，制成1:10的样 品匀液。 用1mL无菌吸管吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁迟缓注于盛有9mL稀释液的无菌试 管中（注意吸管或吸头尖端不要波及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管频频吹打 使其混淆平均，制成1:100的样品匀液。 另取