淋病奈瑟菌和衣原体检测技术和进展知识讲座课件.pptx

淋病奈瑟菌和衣原体检测技术进展;;全国临床检验操作规程（第四版） 女性生殖道沙眼衣原体感染诊治共识（2015） 生殖道沙眼衣原体感染诊断（WS/T 513-2016） 性传播疾病实验室检测指南（2019年） 抗生素敏感性试验执行标准2019，CLSI文件M100 淋病诊断WS 268-2019 梅毒、淋病和生殖道沙眼衣原体感染诊疗指南（2020年） ;淋病奈瑟菌检测技术;;男性：尿痛、尿急、尿频、尿道口红肿、溢脓、可伴全身不适 女性：宫颈炎、尿道炎、阴道炎。女性淋病自觉症状常不明显，而易被忽略 淋菌性结膜炎 淋菌性咽炎和直肠淋病 ;诊断原则：依据流行病学史、临床表现及实验室检查进行综合分析，做出诊断 疑似病例 ： 男性：流行病+临床表现 其他：流行病+临床表现+涂片 确诊病例： 男性：流行病+临床表现+涂片/或培养/或核酸 其他：流行病+临床表现+培养/或核酸;革兰阴性双球菌，直径0.5~1.5um，双肾型凹面相对 生长条件：潮湿、35℃～36℃、5%CO2、pH7.2 干燥环境存活1～2小时，潮湿室温存活?1～2天 56℃1分钟杀灭，100℃即刻死亡，1:4000硝酸银溶液7分钟死亡、1%石碳酸3分钟杀灭、肥皂对淋球菌也有消毒作用;涂片培养鉴定 革兰染色：形态学 培养：分离单个菌落 生化：鉴定、血清型分型 药敏：耐药表型 分子生物学NAT（DNA/RNA）、测序、质谱 鉴定：检测淋球菌 分子分型和耐药机制：变异特征、菌株溯源、进化演变 传播扩散链：流行病学追踪、防控对策 ;;尿液：首段晨尿/憋尿1小时后首段尿 尿道： 男性：拭子伸入尿道口2~3cm，旋转1周，停留数秒后取出 女性：拭子伸入尿道口0.5~1cm，旋转1周，停留数秒后取出 宫颈：拭子伸入女性宫颈管1~2cm，旋转1周，停留数秒后取出 ;常规部位 尿道：男性、 女性 宫颈： 阴道：不适合 外阴：婴、幼儿童 异位 咽部、直肠、眼睫 播散性感染 关节腔、血流、……;女性6370例分泌物培养：宫颈和尿道双部位阳性470例(62.8％) ，单一宫颈阳性112例(17.6％)、单一尿道阳性125例(19.6％) 结论：单一宫颈采样，有可能20%阳性被漏检 ;培养：立即处理 尿液：2500g/min，10min，取沉淀接种TM/MTM（避免离心产生高温） 分泌物：立即接种TM/MTM 核酸：低温保存 分泌物：RNA置于专用保存管 尿液：专用保存管 ;革兰染色 典型：多叶核细胞内G-双球菌 其他：细胞外G-双球菌 ;不推荐直肠和咽部样品直接涂片 应将拭子在玻片上轻轻滚动 涂片厚薄要适合 微热固定涂片 ;支持临床采用病症处理：多形核细胞内G-双球菌 疑似：多形核细胞外G-双球菌、见多形核细胞但无G-双球菌 质控：未见“多形核细胞内G-双球菌”，至少镜检2分钟;最适宜的温度35～36℃、需要5%CO2、＞60%的湿度;脱纤维羊血（绵羊） 营养添加剂（促淋） 混合抗生素（混抗） 基础GC粉 pH7.2; ;菌落形态：圆形、细小、灰白色、凸起、光滑湿润、半透明；菌落边缘呈花瓣状，直经0.5～1.0mm，易乳化有粘性 革兰染色：革兰阴性菌，在多形核白细胞胞浆中成对排列，两菌接触面扁平或稍凹，呈肾形，菌体约0.6μm×0.8μm 生化反应：氧化酶试验（+）、葡萄糖（+）; 淋球菌纯培养后转种;2022/9/20;;;;试剂遇铁造成假阳性，避免用铁质接种环涂菌 0.5%-1%盐酸二甲基对苯二胺-深紫红色 试剂应注意避光、冷藏保存条件 ;高纯度糖 菌应纯分、培养18h、满环洗脱 5%葡萄糖培养基提高敏感性 淋球菌 各种糖+酚红 37℃水箱4小时 产酸、pH值↓ 指示剂由红变黄 ;; ;涂片+培养/核酸+药敏 ;淋病奈瑟菌耐药检测;;2022/9/20;2020全国淋球菌耐药监测;纸片扩散法(disc diffusion test, Kirby-Bauer, K-B) 抗菌药物梯度法(E-test) 琼脂稀释法(agar dilution test) 微量液体稀释法(microdilution method);;;敏感：标准量治疗时失败的可能性<5% 耐药：标准量治疗失败的可能性>15% 中敏：预期失败率5%-15%，较高剂量或延长疗程