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医疗器械微生物检验46446 医疗器械微生物检验46446 细菌、霉菌及酵母菌计数 1.平皿法 采用平皿法进行菌数测定时，应取适宜的连续2~3个稀释级的供试液。 取供试液1ml，置直径90mm的无菌平皿中，注入15~20ml 温度不超过45℃的溶化的营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基或酵母浸出粉胨葡萄琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。每稀释级每种培养基至少制备2个平板。 阴性对照试验 取试验用的稀释液1ml，置无菌平皿中，注入培养基，凝固，倒置培养。每种计数的培养基各制备2个平板，均不得有菌生长。 医疗器械微生物检验46446 细菌、霉菌及酵母菌计数 营养琼脂-细菌 玫瑰红钠琼脂培养基-霉菌 医疗器械微生物检验46446 细菌、霉菌及酵母菌计数 1.平皿法 菌数报告规则： 细菌、酵母菌宜选取平均菌落数小于300、霉菌宜选取平均菌落数小于100的稀释级，作为菌数报告（取两位有效数字）的依据； 以最高平均菌落数乘以稀释倍数的值报告1g、1ml或10cm2供试品中所含的菌数； 如果各稀释级的平板均无菌落生长，或仅是最低稀释级的平板有菌落生长，但平均菌落数小于1时，以1乘以最低稀释倍数的值报告菌数。 医疗器械微生物检验46446 细菌、霉菌及酵母菌计数 2. 薄膜过滤法 取相当于每张滤膜含1g或1ml供试品的供试液，加至适量的稀释剂中，混匀，过滤。若供试品每1g或1ml 所含的菌数较多时，可取适宜稀释级的供试液1ml ，过滤。用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或其他适宜的冲洗液冲洗滤膜，冲洗后取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂培养基或玫瑰红钠培养基或酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基平板上培养。每种培养基至少制备一张滤膜。 阴性对照试验 取试验用的稀释液1ml，照上述薄膜过滤法操作，作为阴性对照。阴性对照不得有菌生长。 医疗器械微生物检验46446 细菌、霉菌及酵母菌计数 2. 薄膜过滤法 菌数报告规则：以相当于1g或1ml供试品的菌落数报告菌数；若滤膜上无菌生长，以＜1报告菌数（每张滤膜过滤 1g或1ml供试品），或＜1乘以稀释倍数的值报告菌数。 医疗器械微生物检验46446 细菌、霉菌及酵母菌计数 在特殊情况下，若营养琼脂培养基上长有霉菌和酵母菌、玫瑰红钠琼脂培养基上长有细菌，则应分别点计霉菌和酵母菌、细菌菌落数。然后将营养琼脂培养基上的霉菌和酵母菌数或玫瑰红钠琼脂培养基上的细菌数，与玫瑰红钠琼脂培养基中的霉菌和酵母菌数或营养琼脂培养基中的细菌数进行比较，以菌落数较高的培养基中的菌数为计数结果。 医疗器械微生物检验46446 医疗器械微生物检验46446 控制菌检查法验证 菌种（菌液制备同前） 大肠埃希菌　　　［CMCC（B）44 102］ 金黄色葡萄球菌　［CMCC（B） 26 003］ 乙型副伤寒沙门菌［CMCC（B） 50 094］ 铜绿假单胞菌 　［CMCC（B） 10 104］ 生孢梭菌 　　　　[CMCC(B) 64 941] 医疗器械微生物检验46446 控制菌检查法验证 （1）试验组 取规定量供试液及10cfu~100cfu试验菌加入增菌培养基中，依相应控制菌检查法进行检查。当采用薄膜过滤法时，取规定量供试液，过滤，冲洗，试验菌应加在最后一次冲洗液中，过滤后，注入增菌培养基或取出滤膜接入增菌培养基中。 （2）阴性菌对照组 设立阴性菌对照组是为了验证该控制菌检查方法的专属性。方法同试验组，验证大肠埃希菌、大肠菌群、沙门菌检查法时的阴性对照菌采用金黄色葡萄球菌；验证铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌，梭菌检查法时的阴性对照菌采用大肠埃希菌。阴性对照菌不得检出。 结果判断 阴性菌对照组不得检出阴性对照菌。若试验组检出试验菌，按此供试液制备法和控制菌检查法进行供试品的该控制菌检查；若试验组未检出试验菌，应采用培养基稀释法、离心沉淀法 、薄膜过滤法、中和法等方法或联合使用这些方法消除供试品的抑菌活性，并重新进行方法验证。 医疗器械微生物检验46446 大肠埃希菌检验 取供试液10ml（相当于供试品1g、1ml、10cm2），直接或处理后接种至适量（不少于100ml）的胆盐乳糖培养基中，培养18~24小时，必要时可延长至48小时。 取上述培养物0.2ml，接种至含5ml MUG培养基的试管内，培养，于5小时、24小时在366nm紫外线下观察，同时用未接种的MUG培养基作本底对照。若管内培养物呈现荧光，为MUG阳性，不呈现荧光，为MUG阴性。观察后，沿培养管的管壁加入数滴靛基质试液，液面呈玫瑰红色，为靛基质阳性；呈试剂本色，为靛基质阴性。本底对照应为MUG阴性和靛基质阴性。 医疗器械微生物检验46446 大肠埃希菌检验 MUG