(3.2.3)--培养基的制备程序.ppt

培养基的制备程序 【知识目标】知道培养基的制备程序和要求。 。 【能力目标】能够独立进行常规培养基的制备 。 任务目标 一、培养基的制备程序 调配：按照培养基的配方准确称量各成分，置于盛有蒸馏水的三角烧瓶中，充分混匀。 溶化：将培养基的各成分混匀于水中，加热溶解。加热过程中应不断搅拌，并防止液体外溢。溶化完毕后应注意补充失去的水分。 矫正pH：用pH比色计、精密pH试纸或比色法可测定培养基的pH值。一般将培养基的pH值矫正至7.4～7.6。有的细菌需要酸性或碱性培养基。由于培养基经高压灭菌后，其pH约降低0.1～0．2，因此矫正pH时应比实际需要的pH高0.1～0.2。 过滤澄清：培养基配成后若有沉渣或浑浊，须过滤使之澄清透明。液体培养基一般用滤纸过滤澄清；固体培养基加热溶化后趁热用绒布过滤，亦可用双层纱布夹薄层脱脂棉过滤。 一、培养基的制备程序 分装： 1）基础培养基：基础培养基一般分装于三角烧瓶中，灭菌后备用。 2）琼脂平板：将溶化的固体培养基（已灭菌），按无菌操作倾人无菌平皿内，轻摇平皿，使培养基铺于平皿底部，凝固后备用。一般内径为90mm的平皿中倾入培养基的量约为13～15ml，如为MH琼脂则每个平皿倾人培养基的量为25ml。内径为70mm的平皿内，倾人培养基约7～8ml较为适宜。 一、培养基的制备程序 分装： 3）半固体培养基：半固体培养基一般分装于试管内，分装量约为试管长度的1/3，灭菌后直立凝固待用。 4）琼脂斜面：制备琼脂斜面应将培养基分装在试管内，分装量为试管长度的1/5，灭菌后趁热放置斜面凝固，斜面长约为试管长度的2/3。 5）液体培养基：液体培养基一般分装在试管内，分装量为试管长度的1/3，灭菌后备用。 一、培养基的制备程序 灭菌：培养基的灭菌可根据其性质和成分选择不同的灭菌方法。普通基础培养基一般用高压蒸汽灭菌，此类培养基分装量少时，用103.4kPa/cm的压力灭菌15分钟即可；若分装量多，则用此压力灭菌30分钟。培养基中若含糖、明胶时，则以68.45kPa/cm。的压力灭菌15分钟为宜。培养基中如含有糖、血清、牛乳、鸡蛋等不耐高温高压的物质，则选用间歇蒸汽灭菌法灭菌。含尿素、血清、腹水等物质的培养基选用过滤除菌为宜。 一、培养基的制备程序 检定：培养基制备后是否符合要求，需要进行质量检查。检查内容包括无菌试验和效果检测。无菌试验是将制备好的培养基置于35℃环境培养18～24小时，若无菌生长说明被检培养基无菌。效果检测则用标准菌株接种在被检培养基上，观察细菌在该培养基上生长的菌落、形态等是否典型。 保存：制备好的培养基注明名称、配制的日期等，置保鲜袋内存放于冰箱（4℃）或冷暗处，保存时间一般不超过2周。培养基贮存时间不宜过长，应根据实际需要制备。 一、培养基的制备程序 谢 谢！