呼吸系统疾病动物模型.ppt

肺纤维化（pulmonary fibrosis）是多种原因引起慢性肺疾病的共同结局，是呼吸衰竭的主要病理基础，其病理改变过程是肺部炎症导致肺泡持续性损伤，经反复破坏、修复、重建，最后引起细胞外基质过度沉积。 第55页，共81页，2022年，5月20日，4点26分，星期四 [造模原理] 博莱霉素(bleomycin)致肺纤维化的机制迄今未明，可能与自由基损伤、免疫机制和胶原调节失调等有关,其中自由基损伤可能是主要机制,活性氧造成急性肺泡炎,进而发展为肺纤维化。 第56页，共81页，2022年，5月20日，4点26分，星期四 [实验动物] 体重200g左右的SD或Wistar大鼠。 [主要试剂] 博莱霉素, 用生理盐水配成4mg/ml溶液.立式照明灯或额戴式喉镜；斜端聚乙烯塑料管(作为气管插管用)。 第57页，共81页，2022年，5月20日，4点26分，星期四 (一)腹腔注射致敏剂豚鼠模型 [动物、试剂与器材] 体重250~300g豚鼠，雌雄不限。10%和0.5%~1%卵清蛋白生理盐水溶液；超声雾化器。 [操作方法] 1.致敏 腹腔注射10%卵清蛋白生理盐水溶液1.0ml（含卵清蛋白100mg）使豚鼠处于致敏状态。 2.激发 注射卵清蛋白后2周，将豚鼠置于密闭有机玻璃箱内，用0.5%~1%卵清蛋白生理盐水溶液超声雾化吸入30s~2min，诱发豚鼠哮喘发作。 3.支气管-肺泡灌洗。 第23页，共81页，2022年，5月20日，4点26分，星期四 [结果及模型评价] 1.豚鼠可出现气喘表现，咳嗽、烦躁、口唇和四肢紫绀，呼吸费力挣扎，呼吸频率加快和呼吸加深。病理检查可发现肺毛细血管扩张、嗜酸性粒细胞浸润和腺体分泌亢进。 2.豚鼠是能最好显示气道高反应性的动物，其哮喘发作与人类的表现相似。 3.用于复制过敏性哮喘动物模型的抗原物质主要有卵清蛋白、蛔虫卵、尘螨、豚草花粉、真菌孢子、蟑螂等。卵清蛋白为蛋清提取物，免疫原性强，来源方便，价格低廉，最常用于复制哮喘模型。 第24页，共81页，2022年，5月20日，4点26分，星期四 4.卵清蛋白激发豚鼠哮喘发作是目前国内外常用的方法，操作简单，可重复性强。本模型主要用于哮喘发病机制研究和治疗效果观察。动物每日引喘1次，反复10~14d，可成为哮喘慢性发作模型。 5.本模型最大的缺点是豚鼠对卵清蛋白反应的个体差异很大，少数豚鼠可能不出现哮喘反应，而一些动物则可发生急性过敏性休克。 第25页，共81页，2022年，5月20日，4点26分，星期四 [注意事项] 1.宜选用等级高、溶解性好的卵清蛋白。 2.超声雾化器应气雾流量较大、雾化颗粒较小。 3.激发用的抗原量和吸入时间非常重要，雾化吸入的卵清蛋白溶液必须用较低浓度，以减少动物死亡。 4.动物一旦出现腹肌明显收缩，应立即将其移出有机玻璃箱，以免因窒息而死亡。 第26页，共81页，2022年，5月20日，4点26分，星期四 二、哮喘离体实验方法 (一)豚鼠气管片法 [基本原理] 将制备的气管片置于盛有营养液的恒温浴槽内,加一定负荷,通过拉力换能器,将致痉剂或受试药对气管作用所产生的张力转换为电信号,放大后由记录仪描记出标本的舒缩曲线,可反映大气道的舒缩变化。 第27页，共81页，2022年，5月20日，4点26分，星期四 ?取出气管, 制备气管片 第28页，共81页，2022年，5月20日，4点26分，星期四 ?制备气管螺旋条 第29页，共81页，2022年，5月20日，4点26分，星期四 ?连接到描记装置 供氧的离体器官浴槽内 第30页，共81页，2022年，5月20日，4点26分，星期四 ?观察药物作用 加组胺或乙酰胆碱——气管条张力达到最高点时,分别加入不同剂量受试药,记录气管条张力变化.求受试药的解痉百分率 给药前曲线高度－给药后曲线高度 解痉百分率（%）＝ ×100 给药前曲线高度 第31页，共81页，2022年，5月20日，4点26分，星期四 第三节 慢性支气管炎模型 第32页，共81页，2022年，5月20日，4点26分，星期四 慢性支气管炎(chronic bronchitis,简称慢支)是指气管、支气管粘膜及其周围组织的慢性非特异性炎症。临床上以反复发作