探讨如何判定筛选溶藻弧菌和哈维氏弧菌共同具有的核酸适配体.docVIP

探讨如何判定筛选溶藻弧菌和哈维氏弧菌共同具有的核酸适配体 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：探讨如何判定筛选溶藻弧菌和哈维氏弧菌共同具有的核酸适配体 1 1、引言 1 2、实验部分 2 3、结果与讨论 7 4、结论 10 文2：一起溶藻弧菌引起的食物中毒 11 1 流行病学调查 11 2 实验室检验 12 2．3．6 血清凝集试验 见表1。 14 3 讨论 15 参考文摘引言： 15 原创性声明（模板） 16 文章致谢（模板） 17 正文 探讨如何判定筛选溶藻弧菌和哈维氏弧菌共同具有的核酸适配体 文1：探讨如何判定筛选溶藻弧菌和哈维氏弧菌共同具有的核酸适配体 1、引言 哈维氏弧菌和溶藻弧菌等水产病原弧菌是养殖环境中的重要病原菌，可感染石斑鱼、银鲷、军曹鱼、鲈鱼、对虾、蟹类等多种水产养殖品种，给养殖业造成巨大的损失[1，2，3，4]。另外，它们还可通过食物和水传播，进而感染人类，严重威胁公共安全[5，6]。因此，对这些弧菌进行快速的检测和鉴定十分必要。但由于弧菌的种类多、变异快、基因相似度较高，传统的微生物培养法和16SrDNA等检测方法对弧菌的检测鉴定效果并不理想[7，8] 核酸适配体是经体外筛选得到的、长度10nt的寡核苷酸序列，可以高效、特异地与靶目标结合，在病原微生物的识别检测、食品安全和靶向治疗等领域得到广泛的关注[9，10，11，12]。然而，目前筛选出的病原微生物的核酸适配体大多识别的是微生物上的特异性位点。 微生物的表面存在有多种位点，有些位点是某种微生物所独有的特异性位点，有些位点则是一些微生物上结构相同或相似的位点，即共有位点。共有位点中有些是同种或同属微生物所共有的，具有种属特异性，可以作为微生物种属鉴定的标记位点。对这些共有位点进行识别，筛选其共有核酸适配体，不仅有助于对这些微生物进行总量分析，对于相关微生物的种属鉴定也具有重要意义。对于不同病原微生物中共有位点的识别及其核酸适配体的筛选，目前还未见报道。本研究以溶藻弧菌和哈维氏弧菌为共同的靶目标，筛选能特异性识别这两种弧菌共有位点的核酸适配体，为后续这两种微生物的识别检测及其种属的识别鉴定奠定了基础。 2、实验部分 仪器与试剂 BIO-TEK全自动酶标仪(美国SynergyHT公司);MG96GPCR仪(杭州朗基科学仪器有限公司);BioDoc-It凝胶成像一体机(美国UVP公司);TGL-16C高速台式离心机(上海安亭科学仪器厂);JM-250电泳仪和电泳槽(大连竟迈生物科技有限公司);SW-CJ超净工作台(苏州泰安空气技术有限公司);HI98127pH计(意大利Hanna公司);DM5000B荧光显微镜(德国莱卡公司) 随机ssDNA文库:5′-TCAGTCGCTTCGCCGTCTCCTTC-N35-GCACAAGAGGGAGACCCCAGAGGG-3′(两端为与引物结合的固定序列，中间为35nt的随机序列);引物P1:5′-TCAGTCGCTTCGCCGTCTCCTTC-3′，引物P2:5′-CCCTCTGGGGTCTCCCTCTTGTGC-3′，引物P3:5′端标记有地高辛的引物P1;5′端标记有FAM荧光基团的核酸适配体C14:FAM-5′-TCAGTCGCTTCGCCGTCTCCTTCGGGGGCGCGGTGAGGGGCTGCACAAGAGGGAGGCACAAGAGGGAGGCACAAGAGGGAGAGCCCAGAGGG-3′;5′端标记有FAM荧光基团的核酸适配体C22:FAM-5′-TCAGTCGCTTCGCCGTCTCCTTCTGCAGGGCCAGAACAGGGGGAAGGCACAAGAGGGAGCACAAGAGGGAGGCACAAGAGGGAGAGCCCAGAGGG-3′。以上文库、引物及核酸适配体序列均由上海生工生物公司合成和标记。DreamtaqDNA聚合酶和缓冲液购自Fermentas公司;dNTP购自GenerayBiotech公司;DNAmarker购自天根生化科技有限公司;琼脂糖购自厦门太阳马生物工程有限公司;辣根过氧化物酶标记的兔抗地高辛抗体购自北京博奥森生物技术公司。实验用水均为超纯水。 20×结合缓冲液:、、三羟甲基氨基甲烷(Tris-HCl)和·6H2O用超纯水溶解并定容至100mL，调pH至，使用时用超纯水稀释为2×和1×缓冲液。番红染色液:番红O(safranine)，溶于100mL95%乙醇中，配成番红原液，于密闭的棕色瓶中避光保存。使用时稀释5倍，配成番红染色液。 微生物及培养基 目标菌:哈维氏弧菌()、溶藻弧菌();非目标菌:嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)、