白藜芦醇预处理对急性乙醇暴露的斑马鱼幼鱼行为的影响.docVIP

白藜芦醇预处理对急性乙醇暴露的斑马鱼幼鱼行为的影响 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：白藜芦醇预处理对急性乙醇暴露的斑马鱼幼鱼行为的影响 1 1材料和方法 2 文2：心肌缺血预处理对未成熟心肌细胞凋亡的影响 6 见图5~7。 9 参考文摘引言： 11 原创性声明（模板） 12 文章致谢（模板） 12 正文 白藜芦醇预处理对急性乙醇暴露的斑马鱼幼鱼行为的影响 文1：白藜芦醇预处理对急性乙醇暴露的斑马鱼幼鱼行为的影响 乙醇是一种水溶性以及脂溶性都非常好的极性小分子，对包括血-脑脊液屏障在内的各种生物膜都具有很强的穿透力，对神经系统的功能有显著影响。动物研究实验表明，乙醇对机体的运动能力、感觉能力乃至包括学习和记忆在内的高级认知功能都有损伤作用[1-4] 斑马鱼是一种在发育生物学以及遗传学研究中被广泛应用的模式生物，近年来在神经药理学研究中的应用也逐渐增多。急性乙醇处理对斑马鱼的神经系统功能以及相关的行为学指标也有显著的影响[5-7] 白藜芦醇是一种主要来源于花生、葡萄、蓝莓、虎杖等植物的天然多酚类化合物，有明显的生物活性，具有保护心血管系统、延缓衰老以及抗癌等功效，同时对于乙醇导致的肝脏以及神经系统损伤具有一定的缓解作用[8-10] 本研究以新兴模式生物斑马鱼作为研究对象，探讨白藜芦醇处理对斑马鱼幼鱼在急性乙醇作用下自发运动、受激运动的影响。 1材料和方法 动物 野生型AB型斑马鱼来源于复旦大学附属儿科医院转化中心，按照Westerfield所著的书[11]中的方法进行养殖和繁殖，室温和水温均为（±）℃，每日14 h光照，10 h黑暗循环（亮灯时间：8∶00，暗灯时间：22：00） 试剂 乙醇为优级纯，国药集团化学试剂；白藜芦醇购自Vetec公司；链霉蛋白酶购自罗氏公司。 药物制备 取1 g链霉蛋白酶，用 ml的灭菌水溶解于50 ml离心管，密封试管，置于37℃水浴45 min，轻柔震荡，制得浓度为45 mg/ml的链霉蛋白酶，分装置于超低温冰箱保存备用。 分别量取乙醇、、 ml，均使用系统水定容至20 ml，制得浓度（v/v%）为%、%、%的乙醇溶液。 电子天平称取白藜芦醇粉末 g，使用系统水定容至1 L，制得浓度为 g/L的白藜芦醇溶液。 仪器 电子天平：德国Sartorius公司；隔水式恒温培养箱：上海精宏实验设备有限公司；Milli-Q超纯水系统：美国Millipore公司；体视显微镜：德国Zeiss公司；斑马鱼行为学分析系统：法国ViewPoint公司；细胞培养TC24孔板（每孔半径r=8 mm）：上海吉泰远成生物科技有限公司。 白藜芦醇预处理 取自然繁殖的0 dPF鱼卵若干颗，用链霉蛋白酶进行脱膜处理。取成功脱模且状态良好的鱼卵300颗并均分为两组，即白藜芦醇处理组和白藜芦醇非处理组。白藜芦醇处理组鱼卵使用 g/L的白藜芦醇溶液从0 dPF养殖到4 dPF，再将 g/L的白藜芦醇溶液换成系统水，养殖至5 dPF。白藜芦醇非处理组鱼卵使用系统水从0 dPF养殖到5 dPF。 行为学检测 将幼鱼转移至24孔板中，每孔1条幼鱼。向孔中加入1 ml不同浓度的乙醇溶液（%、%、%、%）。将24孔板放入行为学分析系统箱体中。 开放旷场实验 斑马鱼幼鱼可以在每个孔中自由游动，由箱体内摄像机记录每个孔中斑马鱼幼鱼的游动轨迹。实验周期设置为40 min，分别是1～25 min处于光照适应期（正常环境）、26～30 min处于光照测试期（正常环境）、31～35 min处于黑暗期、36～40 min光照恢复（正常环境）。光照期：光照强度为100 Lux；黑暗期：光照强度为0 Lux。白藜芦醇处理组和白藜芦醇非处理组各测试3组，所有实验均在9：00～16：00完成。实验过程中，实验室周围保持安静，行为学检测的室温和水温均为（±）℃。 统计学处理 采用Viewpoint软件分析开放旷场实验的视频，导出游动距离、平均游动速度、游动时间等运动参数，30 s/次，并输出相关数据。主要分析第26～30分钟光照w行分析，数据比较采用双因素方差分析和Sidak分析，统计学检验水平设为，以P为差异有统计学意义。 2结果 早期白藜芦醇处理对急性乙醇作用下斑马鱼幼鱼自发运动的影响 双因素方差分析显示，F乙醇=，P乙醇，F白藜芦醇=，P白藜芦醇=。%乙醇作用下白藜芦醇处理组和非处理组的斑马鱼幼鱼游动距离显著增加（P=、）。%乙醇作用下白藜芦醇处理组和非处理组的斑马鱼幼鱼游动距离显著增加（P均）（图1） 双因素方差分析显示，F乙醇=，P乙醇，F白藜芦醇=，P白藜芦醇=。%乙醇作用下白藜芦醇处理组和非处理组的斑马鱼幼鱼游动距离显著增加（P=、）。% P均作用下白藜芦醇处理组和非处