免疫比浊检验技术原理与进展课件.ppt

2021精选ppt 二、免疫沉淀 凝集：细菌、螺旋体和红细胞等颗粒抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称为凝集反应（agglutination）是最经典的免疫学检测技术。 二、免疫沉淀 免疫沉淀反应:(precipitation) 可溶性抗原与相应抗体，在适宜条件下发生结合，出现的沉淀现象。 免疫沉淀 液体内沉淀反应 凝胶内沉淀反应 免疫电泳技术 免疫浊度技术 絮状沉淀试验 环状沉淀试验 单向扩散试验 双向扩散试验 试管法 平板法 免疫电泳 对流免疫电泳 火箭免疫电泳 免疫固定电泳 透射免疫比浊turbidimetermeasure 散射免疫比浊nephelomitermeasure 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 各管抗原倍比稀释 加入抗血清 各管抗体量不变 振摇 混匀、37℃孵育 沉淀量不同 试管内絮状沉淀试验 轻摇 絮 状 沉 示 意 图 淀 Ag Ab Ag Ab Ag 凝胶内沉淀——试管法 单向琼脂扩散试验 凝胶内沉淀试验——平板法 标准品抗原浓度测定 不同病人抗原浓度测定 原理 将一定量的抗体混入琼脂凝胶中，使待测抗原在凝胶中自由扩散，与相应抗体结合形成沉淀环，沉淀环大小与抗原浓度呈正相关。 凝胶内沉淀——双向琼脂扩散原理示意图 Ab Ag 模拟图 染色琼脂图 1.抗原抗体双向自由扩散 2.24小时出结果 3.呈现沉淀线或弧 三、免疫比浊技术原理 当可溶性抗原与相应抗体特异结合，二者比例合适时，在特殊的缓冲液中它们快速形成一定大小的抗原抗体复合物，使反应液体出现浊度。利用现代光学测量仪器对浊度进行测定从而检测抗原含量。 检测器 光源 透镜 滤光片 平光线 散 射 透射光 λ 光波 比浊测定法原理示意图 d 当复合物大于入射光波的1/20时，形成不对称前向散射， 在90o以前的角度测量散射光皆取得最佳效果，散射光 的量代表复合物的量 当复合物小于入射波长时呈全透射， 透射与散射相当 三、免疫比浊技术原理 免疫比浊技术分类： 按光路 透射免疫比浊 散射免疫比浊 按测定时间 终点比浊 速率比浊 按增敏剂 无增敏 PEG增敏 胶乳增敏 透射比浊法和散射比浊法光路 检测器A 检测器B IC I0 Iθ I θ 透射比浊法 散射比浊法 透射免疫比浊法是在180°角， 即在直射角度上测定光透射强度。 散射比浊法在光路的5°～96°角的方向上测量散射光强度。 单色器 透 射 比 浊 计 散射 比浊计 散射比浊和透射比浊的区别示意图 θ 透射光 散射光 散射光 透射免疫比浊法（transmission turbidimetry 原理 抗原与抗体在一定缓冲液中形成IC，当光线透过反应溶液时，由于溶液内IC粒子对光线的反射和吸收，引起透射光减少，IC越多透射光越少，可用吸光度表示。 透射免疫比浊法 溶液中形成的复合物分子应足够大(35-100nm) 溶液中形成的复合物分子要足够多 控制抗原抗体反应的温度和时间 加增敏剂，提高复合物形成速度，缩短检测时间 应选择亲和力好、效价高的抗体，保证抗体过量 将标准品稀释至少5个浓度测定，以吸光度值(A)为纵坐标，浓度为横坐标，在半对数纸上绘出标准曲线 反应要求 免疫比浊分析技术原理与进展 一、免疫学基本原理 二、免疫沉淀 三、免疫比浊技术原理 免疫比浊检验技术原理与进展 一、免疫学基本原理 1、抗原与抗体 2、抗原抗体的结合——免疫学反应 3、免疫学反应的检测技术 1、抗原与抗体 抗原（Antigen, Ag）是刺激机体产生免疫应答的物质。 “应” 是指抗原刺激机体产生免疫应答产物--抗体或免疫效应细胞 “答” 是指相应抗原与免疫应答产物结合并将其排除体外） 抗原的免疫原性和免疫反应性 完全抗原与半抗原 抗原表位与抗原结合价位 1、抗原与抗体 1、抗原与抗体 免疫原性 免疫原性（immunogenecity）是指抗原分子能够刺激机体产生免疫应答（产生特异性抗体及免疫效应细胞）的性质。 Ag T B 致敏T细胞 活化浆细胞 抗体 免疫原性示意图 1、抗原与抗体 免疫反应性：是指抗原分子与免疫应答产物（抗体或免疫效应细胞）发生特异性结合的性质。 Ag T B 致敏T细胞 浆细胞 抗原性（免疫反应性）示意图 抗体 1、抗原与抗体 完全抗原（complete antigen) 具有免疫原性和抗原性的物质。 半抗原（hapten，又称不完全抗原 incomplete antigen ）无免疫原性，只有抗原性的物质。 载体（carrier）赋予半抗原以免疫原性的蛋白质。