成都医学院自学考试要点免疫学.doc

第 PAGE 17 页 共 NUMPAGES 17 页 免疫学检验 第二章 抗原抗体反应 1.IgG为单体分子，是血清和细胞外液中含量最高的免疫球蛋白，约占血清总Ig的75%-80%（P16）。 2. 血清中的IgM为五聚体，因此血清IgM水平升高提示有近期感染，有助于感染性疾病的早期诊断（P16）。 3. IgE介导1型超敏反应，在特异性过敏反应和寄生虫早期感染患者血清中，特异性IgE水平可升高（P17）。 4. 抗原抗体反应的原理：①抗原与抗体能够特异性结合是基于抗原表位与抗体超变区分子间的结构互补性与亲和性，这两种特性是由抗原与抗体分子的一级结构决定的；②抗原和抗体的结合完全依靠非共价键的相互作用，并且抗原复合物和游离成分之间保持动态平衡；③抗原抗体的结合使电荷减少或消失，电子云也消失，蛋白质由亲水胶体转化为疏水胶体（P18）。 5. 抗原抗体结合力： eq \o\ac(○,1)库伦引力， eq \o\ac(○,2)范德华力， eq \o\ac(○,3)氢键结合力， eq \o\ac(○,4)疏水作用力；范德华引力提供的作用力最小，疏水作用力提供的作用力最大。（P19）。 6. 亲和力（affinity）：是指抗体分子上一个抗原结合位点与对应的抗原表位之间相适应而存在着的引力，它是抗原抗体间固有的结合力。抗体超变区与抗原表位之间分子空间构型的吻合程度影响着抗体亲和力。吻合程度越高，亲和力越高。亲和力可用亲和常数KA来表示：KA=K1/K2=【Ab-Ag】/【Ab】×【Ag】（KA 表示抗原抗体结合的稳定性和亲和力；K1 表示结合常数；K2 为解离常数；【Ab-Ag】表示抗原抗体复合物的摩尔浓度；【Ab】或【Ag】分别表示游离的抗体或抗原结合位点的摩尔浓度）KA值越大，【Ab-Ag】浓度越大，亲和力越高，抗体与抗原结合越牢固，反之抗原抗体复合物就容易解离。抗原抗体的结合使电荷减少或消失，电子云也消失，蛋白质由亲水胶体转化为疏水胶体。此时，如再加入电解质，如NaCl，则进一步使疏水胶体物相互靠拢，形成可见的抗原抗体复合物。（P19） 7.亲合力（avidity）：是指一个抗体分子与整个抗原之间的结合强度，可用来表示抗原和抗体复合物的整体稳定性。（P20） 8.抗原抗体反应的特点： eq \o\ac(○,1)特异性； eq \o\ac(○,2)抗原抗体的比例； eq \o\ac(○,3)可逆性。（P20） 9.带现象：在等价带前后分别为抗体过剩或抗原过剩，形成的沉淀物少或无，这种现象在免疫测定中称带现象。出现在抗体过量时，称为前带；出现在抗原过量时，称为后带（概念）在环境因素中，凡是减弱或消除抗原抗体亲和力的因素都会使复合物解离增加。如pH改变，过高或过低的pH均可破坏离子间的静电引力，使抗原抗体的结合力下降。（P21） 10.抗原抗体反应的可逆性：抗原与抗体的结合是可逆的。抗原抗体复合物的解离取决于两个方面的因素：一是抗体对相应抗原的亲和力；二是环境因素对复合物的影响。对亲和力本身较弱的反应体系而言，仅增加离子强度即可达到解离抗原抗体复合物的目的，改变pH和增加离子强度是最常有的促解离方法；（P21） 11.影响抗原抗体反应的因素包括： eq \o\ac(○,1)反应物自身因素（抗原因素和抗体因素）； eq \o\ac(○,2)反应条件：电解质，酸碱度，温度，抗原抗体比例。（P23） 第三章 抗原抗体的纯化 12. 差速离心的分离效果是粗分离，适用于分子量相差大、不稳定、易变形的物质。常用于分离细胞器和病毒。优点是操作简单，方便；缺点是分离效果较差，费时，不能一次得到纯样品；管壁效应严重，特别当颗粒较大或浓度很高时，沉淀出现在离心管壁一侧；颗粒被挤压，离心力过大和离心时间过长，都会使颗粒变形，聚集而失活。（P24-P29） 13.盐析法：从血清中抽取Ig的方法是盐析法；常用的中性盐是硫酸铵，其优点是：①溶解度大；②温度系数小；③密度小；④价廉易得；高浓度盐析法是由于盐分子与蛋白质分子极化部位相互作用，降低了蛋白质分子的亲水性而将其分级分离，是粗纯样品的重要方法； （P29） 14.凝胶层析（gel chromatography）：又称凝胶排阻层析（gel exclusion chromatography）、分子筛层析（molecular sieve chromatography）等，它是以各种多孔凝胶为固定相，利用物质的相对分子量不同而达到分离的一种层析技术。（P40） 15.常用凝胶有葡聚糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶以及聚丙烯酰胺和琼脂糖之间的交联物（P41） 16.亲和层析：纯化抗血清须先用盐析法初提，然后用亲和层析法纯化。亲和层析的原理是利用分子间亲和力的特异性和可逆性，对另一个分子进行分离纯化。亲和层析一次