基于高效液相色谱的对乳制品中β-酪蛋白分型的方法[发明专利].pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 108072725 A (43)申请公布日 2018.05.25 (21)申请号 201610983381.9 (22)申请日 2016.11.09 (71)申请人 北京奶牛中心 地址 100192 北京市朝阳区德胜门外清河 南镇 (72)发明人 刘林　吕小青　赵凤　水明　 赵凤茹　王彦平　李艳华　张建聪　 曾伊凡　李智洋　高耀超　 (74)专利代理机构 北京汇智英财专利代理事务 所(普通合伙) 11301 代理人 何晖 (51)Int.Cl. G01N 30/74(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/86(2006.01) 权利要求书1页 说明书5页 附图2页 (54)发明名称 基于高效液相色谱的对乳制品中β-酪蛋白 分型的方法 (57)摘要 本发明涉及一种基于高效液相色谱的对乳 制品中β-酪蛋白分型的方法，包括如下步骤： S1：制备β-酪蛋白标准品；S2：制备β-酪蛋白样 品；S3：制备第一流动相和第二流动相；S4：在液 相色谱仪中进样样品后，不同时间以不同浓度比 例的第一流动相和第二流动相的混合液分别冲 洗样品和标准品，根据标准品中β-酪蛋白两种 不同结构样品的出峰时间，实现β-酪蛋白样品 中不同结构样品的分离；其中，所述第一流动相 为三氟乙酸水溶液，第二流动相为乙腈溶液。本 发明提供的基于高效液相色谱的对乳制品中β- A 酪蛋白分型的方法，简单易行、方便可靠、重现性 5 好、准确度高，能够实现对样品的批量检测，大大 2 7 2 减少分析时间。 7 0 8 0 1 N C CN 108072725 A 权　利　要　求　书 1/1页 1.一种基于高效液相色谱的对乳制品中β-酪蛋白分型的方法，其特征在于：包括如下 步骤： S1：制备β-酪蛋白标准品； S2：制备β-酪蛋白样品； S3：制备第一流动相和第二流动相； S4：在液相色谱仪中进样样品后，在不同时间以不同浓度比例的第一流动相和第二流 动相的混合液分别冲洗β-酪蛋白样品和β-酪蛋白标准品，根据β-酪蛋白标准品中β-酪蛋白 两种不同结构样品的出峰时间，实现β-酪蛋白样品中不同结构样品的分离； 其中，所述第一流动相为三氟乙酸水溶液，第二流动相为乙腈溶液。 2.如权利要求1所述的基于高效液相色谱的对乳制品中β-酪蛋白分型的方法，其特征 在于：所述步骤S4中，从β-酪蛋白样品中分离出的不同结构样品分别为A1型β-酪蛋白以及 A2型β-酪蛋白。 3.如权利要求1所述的基于高效液相色谱的对乳制品中β-酪蛋白分型的方法，其特征 在于：所述β-酪蛋白样品的制备方法包括： S21：取冷冻奶样，加入第一工作液，使冷冻奶样融化后振荡混匀，室温静置得混合液； S22：将混合液离心，去除表层乳脂，得底层溶液； S23：将底层溶液以第二工作液稀释，混匀、过滤得β-酪蛋白样品。 4.如权利要求3所述的基于高效液相色谱的对乳制品中β-酪蛋白分型的方法，其特征 在于： 所述第一工作液为双-三羟甲基氨基甲烷缓冲液、盐酸胍、柠檬酸钠以及二硫苏糖醇的 混合液，其中，混合液中各物质的摩尔浓度分别介于：0.05-0.15mol/L、4-8mol/L、5-8mmol/ L、15-25mmol/L； 所述第二工作液的溶剂为质量浓度介于0.5-1.5