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蛋白酶修复(PIER)原理 蛋白酶的消化通过破坏福尔马林造成的蛋白交联,实现抗原的修复。 该方法的缺点是:破坏组织的完整性,会破坏抗原,而且酶的浓度,反应时间,反应温度造成很大的差异,标准化难度较大。 * 抗原修复的操作 热修复(HIER) 蛋白酶修复(PIER) 双重修复 * 热修复(HIER) 高压修复 煮沸法修复 微波修复 水浴加热…… * 高压修复 切片先脱蜡水化 将修复液注入高压锅,将液体煮沸 放入切片(甩开水分) 盖上盖子,等喷气,计时1.5~2分钟(800W~1000W) 冷却,冲洗玻片上的修复液 * 1.5-2min 10min * > 高压锅直接修复 高压锅隔水间接修复 * 煮沸法修复 将修复液注入不锈钢锅中 煮沸后,加入切片(甩干水分) 用保温档,处理20分钟左右 冷却,冲洗玻片上的修复液 * * 蛋白酶修复(PIER) 切片脱蜡水化 切片上滴加酶,放入孵育盒,处理一定时间 时间到,取出切片,冲洗。 * 双重修复 脱蜡水化后,对切片进行胰酶消化 然后,对切片进行热修复 * 免疫组化抗原修复简介 * 为何要进行抗原修复 抗原修复的种类 抗原修复的原理 抗原修复的操作 抗原操作的应用 * 为何要进行抗原修复 常规的石蜡切片的组织要经过福尔马林固定和石蜡包埋,虽然上述过程能良好的保存标本在光镜下的形态,但是会不同程度地破坏组织的抗原,降低组织的抗原与抗体的免疫反应率。 * 抗原修复的种类 热修复(HIER) 蛋白酶修复(PIER) 双修复(特殊抗原和双染) 不修复 * 抗原修复的原理 抗原修复目前常用的有热修复(HIER),蛋白酶修复(PIER)和不修复。不同的修复的原理不同。 热修复的原理 蛋白酶修复原理 * 热修复(HIER)的原理 “石说”:固定通过改变蛋白结构降低免疫反应性,AR逆转大部分福尔马林导致的蛋白修饰,冷却后,会重建“近天然”的结构,免疫反应的恢复是通过蛋白表位的复性。 * 热修复的特点 易于施行 易于标准化 *
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