薄层色谱法分析和总结.pdfVIP

薄层色谱法 薄层色谱法，系将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。待点样、展开后，与适宜的对照物按同法所得的 色谱图作对比，用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。 1. 仪器与材料 1.1 玻板 除另有规定外，用 5cm×20cm，10cm×20cm 或 20cm×20cm 的规格 , 要求光滑、平整，洗净后不附水珠，晾干。 1.2 固定相或载体 最常用的有硅胶 G、硅胶 GF[254] 、硅胶 H、 硅胶 HF[254], 其次有硅藻土、硅藻土 G、氧化铝、氧化铝 G、 微晶纤维素、 微晶纤维素 F[254] 等。 其颗粒大小 , 一般要求直径为 10～40 μm。薄层涂布 , 一般可分无粘合剂和含粘合剂两种 ; 前者系将固定相直接涂布于玻璃板上 , 后者系在固定相中加入一定量的粘合剂， 一般常用 10～ 15％煅石膏 (CaSO4.2H2O在 140℃烘 4 小时 ) ，混匀后加水适量使用， 或用羧甲基纤维素钠水溶液 (0.5 ～ 0.7 ％) 适量调成糊状，均匀涂布于玻璃板上。 也有含一定固定相或 缓冲液的薄层。 1.3 涂布器 应能使固定相或载体在玻璃板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。 1.4 点样器 同纸色谱法项下。 1.5 展开室 应使用适合薄层板大小的玻璃制薄层色谱展开缸，并有严密的盖子，除另有规定外，底部应平整光滑，应便于观察。 2. 操作方法 2.1 薄层板制备 除另有规定外 , 将 1 份固定相和 3 份水在研钵中向一方向研磨混合 , 去除表面的气泡后，倒入涂布器中 , 在玻板上平 稳地移动涂布器进行涂布（厚度为 0.2 ～ 0.3mm），取下涂好薄层的玻板，置水平台上于室温下晾干，后在 110℃烘 30 分钟，即置有 干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度（可通过透射光和反射光检视）。 2.2 点样 除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边 2.0cm ，样点直径及点间距离同纸色谱法 , 点间 距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。 2.3 展开 展开室如需预先用展开剂饱和， 可在室中加入足够量的展开剂，并在壁上贴二条与室一样高、 宽的滤纸条， 一端浸入展开 剂中，密封室顶的盖，使系统平衡或按正文规定操作。 将点好样品的薄层板放入展开室的展开剂中 , 浸入展开剂的深度为距薄层板 底边 0.5 ～ 1.0cm （切勿将样点浸入展开剂中） , 密封室盖 , 待展开至规定距离 ( 一般为 10～ 15cm), 取出薄层板，晾干，按各品种项下 的规定检测。 2.4 如需用薄层扫描仪对色谱斑点作扫描检出， 或直接在薄层上对色谱斑点作扫描定量， 则可用薄层扫描法。 薄层扫描的方法， 除 另有规定外，可根据各种薄层扫描仪的结构特点及使用说明，结合具体情况，选择吸收法或荧光法，用双波长或单波长扫描。由于 影响薄层扫描结果的因素很多，故应在保证供试品的斑点在一定浓度范围内呈线性的情况下，将供试品与对照品在同一块薄层上展 开后扫描，进行比较并计算定量，以减少误差。各种供试品，只有得到分离度和重现性好的薄层色谱，才能获得满意的结果。