1.2基因工程的基本操作程序.ppt

2.微生物作受体细胞原因： 将目的基因导入微生物细胞 3.转化方法： 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少 处理细胞→ 细胞→表达载体与感受态细胞混合→_______细胞吸收DNA分子。 Ca2+ 感受态 感受态 1.常用菌： 大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌等。 该方法是根据碱基互补配对原则，把互补的双链DNA解开，把单链的DNA小片段用同位素、荧光分子或化学发光剂等实行标记，之后同被检测的DNA中的同源互补序列杂交，从而检出所要查明的DNA或基因。 分子杂交技术 2. 检测目的基因是否转录出了mRNA 显出杂交带 （表明目的基因已转录出了mRNA） 检测DNA利用的是DNA与DNA杂交，检测mRNA利用的是DNA与mRNA杂交。 提取受体生物的mRNA 2.微生物作受体细胞原因： 将目的基因导入微生物细胞 3.转化方法： 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少 处理细胞→ 细胞→表达载体与感受态细胞混合→_______细胞吸收DNA分子。 Ca2+ 感受态 感受态 1.常用菌： 大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌等。 PCR扩增过程 ①DNA变性(90℃-95℃)：双链DNA模板在热作用下， 断裂，形成 。 ②复性(55℃-60℃)：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部 。 ③延伸(70℃-75℃)：在Taq酶的作用下，从引物的5′端→3′端延伸，合成与模板链互补的_______。 氢键 单链DNA 双链DNA DNA链 2. 检测目的基因是否转录出了mRNA 显出杂交带 （表明目的基因已转录出了mRNA） 检测DNA利用的是DNA与DNA杂交，检测mRNA利用的是DNA与mRNA杂交。 提取受体生物的mRNA 1.2基因工程的基本操作程序 第一步：目的基因的获取 第二步：基因表达载体的构建 第三步：将目的基因导入受体细胞 第四步：目的基因的检测与鉴定 1）从基因所在的生物体直接获取 利用PCR技术扩增目的基因 3）人工合成 2）mRNA反转录成cDNA 目的基因的获取 4)从基因文库中获取目的基因 1.2基因工程的基本操作程序2.微生物作受体细胞原因： 将目的基因导入微生物细胞 3.转化方法： 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少 处理细胞→ 细胞→表达载体与感受态细胞混合→_______细胞吸收DNA分子。 Ca2+ 感受态 感受态 1.常用菌： 大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌等。 该方法是根据碱基互补配对原则，把互补的双链DNA解开，把单链的DNA小片段用同位素、荧光分子或化学发光剂等实行标记，之后同被检测的DNA中的同源互补序列杂交，从而检出所要查明的DNA或基因。 分子杂交技术 2. 检测目的基因是否转录出了mRNA 显出杂交带 （表明目的基因已转录出了mRNA） 检测DNA利用的是DNA与DNA杂交，检测mRNA利用的是DNA与mRNA杂交。 提取受体生物的mRNA 2.微生物作受体细胞原因： 将目的基因导入微生物细胞 3.转化方法： 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少 处理细胞→ 细胞→表达载体与感受态细胞混合→_______细胞吸收DNA分子。 Ca2+ 感受态 感受态 1.常用菌： 大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌等。 PCR扩增过程 ①DNA变性(90℃-95℃)：双链DNA模板在热作用下， 断裂，形成 。 ②复性(55℃-60℃)：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部 。 ③延伸(70℃-75℃)：在Taq酶的作用下，从引物的5′端→3′端延伸，合成与模板链互补的_______。 氢键 单链DNA 双链DNA DNA链 2. 检测目的基因是否转录出了mRNA 显出杂交带 （表明目的基因已转录出了mRNA） 检测DNA利用的是DNA与DNA杂交，检测mRNA利用的是DNA与mRNA杂交。 提取受体生物的mRNA ②用__________切割目的基因，使其产生 。 ①用一定的 切割质粒，使其出现一个切口，产生_________。 (基因工程的核心) ③将切下的目的基因片段插入质粒的_____处，再加入适量__________，形成了一个重组DNA分子(重组质粒)。 限制酶 黏性末端 同种限制酶 同种黏性末端 切口 DNA连接酶 基因表达载体的构建 （一）构建目的 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可遗传给下一代，同时，使目的基因能够表达和发挥作用。 （二）构建零件及其作用 ①目的基因 ②