《薄层层析法》ppt课件模板.ppt

2021/7/26 2021/7/26 2021/7/26 (2)展开操作 展开操作是在密闭的容器中进行的，根据薄层板的大小，选择不同的层析缸。配好展开剂，将展开剂（一般2-10mL）倒入层析缸，密闭放置一定时间，待层析缸被展开剂饱和后（目的是防止边缘效应的产生），再迅速将薄层板放入（注意：切勿使溶剂浸没样品点，展开剂浸入薄层高度约0.5mm即可），密闭，展开即开始。当溶剂移动到接近薄板上端边缘时，取出薄板，画出溶剂前沿。 展开方式可以分为： A、上行展开法和下行展开法 B、单次展开法和多次展开法 C、单向展开法和双向展开法 2021/7/26 ③显色：一般纸层析用的显色剂，均可用在薄层层析上。 通常在展开结束后，首先可用紫外线分析灯观察有无萤光斑点，用小细针在薄层上划出斑点位置，再选择显色剂显色，软板与硬板显色方法不同，现分述如下: (1)软板的四种显色法：软板因不含粘合剂，直接喷洒显色剂，可将吸附剂吹散，造成整个试验失败。故采用下述方法: 1)喷雾法:每类化合物都有特定的显色剂。展开完毕，进行喷雾显色，多数在日光下可找到色点。注意：氧化铝软板在展开后，取出立即划出前沿，趁湿喷雾显色，如果干后显色，吸附剂会被吹散。 2021/7/26 2)碘蒸汽法 3)压板法 4)侧吮法 5） 生物印迹法：抗生素等生物活性物质可以用生物印迹法进行。取一张滤纸，用适当的缓冲溶液浸湿，覆盖在板层上，上面用另一块玻璃压住。10-15分钟后取出滤纸，然后立即覆盖在接有实验菌种的琼脂平板上，在适当温度下，经过一定时间培养后，即可显出抑菌圈。 6）紫外线照射法：常用254nm和365nm波长的紫外线。 (2)硬板的显色:可将显色剂直接喷洒在薄层上,进行显色，有立即显色的。也有加热一定温度后才显色的。如喷10%硫酸，加热100℃后才能显色。 2021/7/26 2021/7/26 2021/7/26 四、影响薄层层析效果的主要因素 薄层层析的R f 值的精确度仅达±0.05。如果要想获得两次完全重现的R f值，则必须使两次测定条件完全一致。所以通常作样品成分鉴定时，都采用已知成分对照展开，最理想的R f 值为0.4—0.5。良好的分离在0.15—0.75。若小于0.15或大于0.75者，则分离不好。其影响因素主要有以下几点: 2021/7/26 1温度。 2薄层的物理状态。 3展开时间和展开距离: 4层析缸内展开剂蒸汽的饱和程度: 5吸附剂的酸碱性: 6展开剂的组成: 7展开剂的pH 8样品的性质及浓度: 9其他除上述因素外，吸附剂的粒度，薄层板的活化程度(加热时间和温度)以及溶剂的纯度、展开方式、层析缸的大小形状等等皆能影响R f 值，致使薄层层析的R f 值重现性较差。因此不能仅用R f值来鉴定未知成分，必须用已知样品作对照。 2021/7/26 五、应用 1无机及有机化合物的鉴别: 2含量测定: 3微量分离: 4快速有效的选择柱层析用的展开剂及鉴定柱层析的分离效果。 5在薄层板上进行斑点微量化学反应，如氧化还原及衍生物的制备等，进一步鉴定物质的成分。 6为植物分类学中化学成分的快速鉴定提供了方法。 2021/7/26 7化合物分子功能基的研究:利用功能基与吸附力的不同已研究了甾体骨架上功能基的位置与构型之间的关系,并研究了各种功能基的吸附力。 8化合物分子空间异构体的分离:如纸层析对分离对位和邻位的香兰素极易分离。 9放射性化合物的测定分离:应用一种连续自动装置,可以从薄层板上直接测定放射性化合物的活性。 10配合微生物测定法进行抗菌素的鉴定。 2021/7/26 作业: 1、薄层色谱法常用的显迹方法有哪些？试述其适用范围。 2、薄层色谱法的操作要点有哪些？ 2021/7/26 演讲结束，谢谢大家支持 * 2021/7/26 On the evening of July 24, 2021 Courseware template