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第六章薄层色谱和柱色谱分离制备 特殊柱色谱分离制备 第六章薄层色谱和柱色谱分离制备 1.快速柱层析（ 加压色谱技术） Flash Column Chromatography FCC特点： 1）快速柱层析（FCC）可克服普通柱分离的缺陷，它具有快速省时、分离效率高、简单易行的优点，所以国内外实验室基本都倾向于用此法。 2）对于 0.01-10g的样品，Rf值0.15的情况下，在 10-15分钟可快速得到分离。 该法首先由 still于 1978年详细介绍，1981年获专利保护。 ? 第六章薄层色谱和柱色谱分离制备 一、实验条件 1、吸附剂硅胶：选用 60埃，粒度为 40-63um (230-400目)。过大、过小都会使分离度减少。 2、流动相 A 、通常以 TLC层析条件为依据，对被分离成分，要求 Rf值在 0.35左右 B、选择在 TLC板上对混合成分有良好的分离。要求△Rf0.15 △Rf值=0.1时，上样量小时也能分离。 C、流速：由实验证实，使用硅胶 60 （40－63um）作为固定相，流速为 2in/min时，可得到昀好的分辨率 第六章薄层色谱和柱色谱分离制备 3、干法装柱： 硅胶高度 5-6in≈15cm左右 装柱法与普通法相同 溶剂加入后，加压，排除空气，并使硅胶溶剂化。 第六章薄层色谱和柱色谱分离制备 4、上样、洗脱与收集 采用 40-63um硅胶为吸附剂时，柱的大小、硅较用量、加样量、每次收集的体积见表 压力泵一般要求 0.4-0.3Kg/cm2 即可。约 2bar/30psi.(每平方英吋磅)，可通过控制流速 2in/min 来实现。与层析柱上端相接的塞子是一个压力控制伐，可调节压力而调节流速如图所示。 第六章薄层色谱和柱色谱分离制备 第六章薄层色谱和柱色谱分离制备 减压液相柱色谱（VLC） Vacuum Liquid Chromatography 是近几年来国外实验室迅速发展起来的新技术，它是利用柱后减压使洗脱剂迅速通过固定相从而很好的分离样品的色谱技术。 VLC具有快速，简易，高效，价廉等优点，目前已成功的应用于有机制备以及天然产物如萜类，类酯，双萜及多种生物样品的分离。 第六章薄层色谱和柱色谱分离制备 VLC特点 VLC不同于常压柱层析和快速柱层析 Fcc，因为后两者洗脱剂是连续的，在操作中不会间断；而 VLC进行溶剂洗脱时，在加洗脱剂后，在柱后减压下全部抽出，每一次洗脱收集一次，抽干后，再更换溶剂，并再进行下一个流分的收集， FCC采用柱前加压，而 VLC采用柱后减压. VLC可分离样品量达几十克，而 FCC只能分离几克。 VLC吸附剂经处理后可反复使用。 第六章薄层色谱和柱色谱分离制备 实验条件 1.固定相；常采用 TLC用硅胶、Al2O3,（粒度：10um～40um硅胶 60H或 60G）聚酰胺等 2. 装柱：干法装柱法。将吸附剂装入漏斗或短柱中，轻轻拍紧或减压拍打或从顶端挤压，直至吸附剂紧密，昀后变得坚硬。吸附剂的高度一般不超过 5cm。 第六章薄层色谱和柱色谱分离制备 3，吸附剂用量： （1）对于微量分离，样品＜100mg,可采用直径为 0.5～1cm色谱柱或漏斗，吸附剂高度为 5cm，一般固定相用量为 10～15：1倍，可在小试管中收集流分。 （2）对于 0.5～1.0g样品，柱中装有 2.5×4cm高度的吸附剂较合适。 （3）对于 1～10g样品的分离，可在柱中装入 5×5cm的吸附剂。 （4）较大样品分离，昀好采用 250ml砂芯漏斗中进行。吸附剂的高度为 5cm。可用三角烧瓶收集之。加大吸附剂与样品比例，可提高分离度。常用比例为 30：1～300：1 第六章薄层色谱和柱色谱分离制备 上样 放掉真空后，常压下加入低极性溶剂于吸附剂表面上，减压使溶剂均刀流过吸附剂。如有空隙，需要重装。使柱子抽干后，重复 1～2次，即可准备上样。 A．用低极性溶剂或洗脱剂（如石油醚、正己烷）溶解样品。常压下小心加入柱顶端，再加入洗脱剂或溶剂覆盖吸附剂表面，慢慢减压，使样品在柱顶端形成样品层。 B．可也采用固体上样法。即先将样品溶于极性溶剂，加入 5～10份吸附剂，旋转蒸发至干后，加到吸附剂的表面上，然后进行洗脱。 第六章薄层色谱和柱色谱分离制备 VLC流动相选择 与柱层析相同，先用 TLC来选择条件。VLC更适用于梯度洗脱，可用二元，三元混合溶剂系统。一般先用极性较小溶剂，如石油醚、正己烷、环己烷，然后逐渐加大极性（CH2Cl2、Et2O、AcOEt、 CH3OH）极性溶剂的增加开始要缓慢（1%，2%，3%等），然后增加的幅度可逐渐增大（5% 10% 20%等），通常收集 20～25个流分可将所有成分洗脱。 第六章薄层色谱和柱色