gfp蛋白的表达分离与纯化.pptxVIP

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2021-04-15 发布于上海
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gfp蛋白的表达分离与纯化.pptx

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试验流程考核形式课堂提问——每人2-3个问题；权重：30%总结报告——PPT，5人一组，10分钟；权重：30%实验报告——权重：40%要求：标准的论文格式：中、英文标题和摘要；前言；材料与方法；结果；讨论；参考文献。PPT：照片、视频展示个性，潮！时间安排Day 0: 准备实验材料Day 1: GFP表达质粒的提取；Top 10感受态细胞的制备；GFP表达质粒转化Top 10。Day 2: GFP表达菌株扩大培养；GFP的诱导表达。Day 3: 表达菌株的收集、破碎；硫酸铵沉淀所用浓度的确定；硫酸铵沉淀GFP；疏水层析。Day 4: 离子交换层析；透析；凝胶过滤层析。Day 5: SDS；染色；脱色，观察结果。记得带照相机！无菌操作鸣谢：生命学院生物科学104班邹兵周嘉赵琅李运彰汪源蛋白质表达原核：E.coli真核：Yeast Insect mammals原核表达系统Vector: pET series, pGEX series, gateway series,pMAL, pTWIN I, pETDuet, et. al.E.Coli host BL21(DE3), BL21(DE3, pLysS), Origami, Rosetta, Rosetta-gamiTop10, HB101, C41/C43思考：能否用BL21(DE3)表达pGLO？能否用Top10表达pET32a？Culture conditionsOD600=0.6-0.8，加入诱导剂；OD600=1.2-1.4，收获菌体；诱导剂用量 IPTG: 0.2mM; 0.5mM; 1mM诱导温度 20℃；25/28 ℃；37 ℃留样——set control如何留样能在一张SDS胶图中(10-12 wells)体现诱导的效果、(NH4)2SO4粗分离效果、疏水层析纯化效果、离子交换层析纯化效果、凝胶过滤层析纯化效果？HICIECGFC样品体积对分辨率的影响留样——set control如何留样能在一张SDS胶图中(10-12 wells)体现诱导的效果、(NH4)2SO4粗分离效果、疏水层析纯化效果、离子交换层析纯化效果、凝胶过滤层析纯化效果？样品体积对分辨率的影响