《生物化学简明教程》第四版-第二章蛋白质.ppt

2021/3/27 * LiBH4还原法 多肽+ LiBH4 α-氨基醇+ n氨基酸 含C—端氨基酸,用层析法鉴定 水解 2021/3/27 * （6）裂解多肽链成较小的片段 酶解法:如:胰蛋白酶,糜蛋白酶,胃蛋白酶,嗜热菌蛋白酶,羧肽酶和氨肽酶 化学法:如:溴化氰法 羟胺法 2021/3/27 * 胰蛋白酶 R1=Lys和Arg侧链（专一性较强,水解速度快）。 R2=Pro 水解受抑。 2021/3/27 * 胰凝乳蛋白酶 R1=Phe, Trp,Tyr时水解快; R1= Leu,Met和His水解稍慢。 2021/3/27 * 化学法:可获得较大的肽段 溴化氰(CNBr)水解法: 它能选择性地切割由甲硫氨酸的羧基所形成的肽键。 2021/3/27 * 羟胺（NH2OH）: 专一性断裂-Asp-Gly-之间的肽键。 也能部分裂解-Asn-Leu-之间的肽键以及-Asn-Ala-之间的肽键。 2021/3/27 * 常用的断裂多肽链的方法 溴化氰裂解法: 专一性水解Met的羧基端; 胰蛋白酶水解法: 专一性水解Lys、Arg的羧基端; 胰凝乳蛋白酶水解法: 专一性水解Tyr、Phe、Trp的羧基端; 胃蛋白酶水解法: 专一性断裂键两端都是疏水氨基酸; 金黄色葡萄球菌 蛋白酶水解法: 专一性水解Glu、 Asp的羧基端; 梭状芽孢杆菌蛋白酶水解法: 专一性水解Arg的羧基端; 2021/3/27 * （7）肽段氨基酸序列的测定 ① Edman降解法 2021/3/27 * 氨基酸自动测序仪 使用氨基酸顺序测定仪,测定各条肽段的氨基酸顺序。一般采用Edman降解法,用异硫氰酸苯酯进行反应,将氨基酸降解后,逐一进行测定。 2021/3/27 * ②质谱法 质谱法的原理 是待测化合物分子吸收能量（在离子源的电离室中）后产生电离,生成分子离子,分子离子由于具有较高的能量,会进一步按化合物自身特有的碎裂规律分裂,生成一系列确定组成的碎片离子,将所有不同质量的离子和各离子的多少按质荷比记录下来,就得到一张质谱图。由于在相同实验条件下每种化合物都有其确定的质谱图,因此将所得谱图与已知谱图对照,就可确定待测化合物。? 串联质谱法,又称为质谱－质谱法/MASS?SPECTROMETRY/?MASS?SPECTROMETRY?(MS/MS)???? 利用串联质谱仪进行化合物分析的方法。第一级质谱的离子源里生成离子群,从中选择其中的一种作为母离子,在第二级质谱中,对母离子裂解生成的子离子进行检测。为了使母离子裂解,在第一级质谱和第二级质谱之间设置碰撞室,发生碰撞诱导解离（CID）。  2021/3/27 * ③通过核酸来推演蛋白质中的氨基酸序列 按照三联密码的原则推演出氨基酸的序列 分离编码蛋白质的基因 测定DNA序列 排列出mRNA序列 2021/3/27 * （4）蛋白质的胶体性质 蛋白质分子的颗粒直径已达1~100nm,处于胶体颗粒的范围。 布朗运动、丁道尔现象、电泳现象,不能透过半透膜,具有吸附能力 蛋白质溶液稳定的原因:1）表面形成水膜（水化层）; 2）带相同电荷。 + + + + + + 2021/3/27 * 透 析 由于蛋白质分子体积很大,不能透过半透膜,而小分子物质能透过半透膜,这样可把蛋白质分子与小分子物质分开,这个过程叫透析. 2021/3/27 * + + + + + + + 带正电荷的蛋白质 － － － － － － － － 带负电荷的蛋白质 在等电点的蛋白质 水化膜 + + + + + + + + 带正电荷的蛋白质 － － － － － － － － 带负电荷的蛋白质 不稳定的蛋白质颗粒 酸 碱 酸 碱 酸 碱 脱水作用 脱水作用 脱水作用 溶液中蛋白质的聚沉 （5）蛋白质的沉淀反应 2021/3/27 * 1 .中性盐沉淀反应 : 加盐使蛋白质沉淀析出盐析 稀盐可使蛋白质表面同性电荷增加,增加蛋白质分子间的排斥, 同时与水分子间的作用增强,而增加溶解性—盐溶作用;高盐破坏水膜、中和电荷, 蛋白质聚集沉淀—盐析, 不同蛋白质盐析的盐浓度不同, 故用不同盐浓度分级沉淀蛋白质, 分离的蛋白质不变性。 分段盐析: