病毒与细胞相互作用.pptxVIP

第一节 病毒的培养;动物接种：;可采用绒毛尿囊膜、尿囊腔、羊膜腔接种。;人或动物细胞在一定条件下可在实验室的培养瓶内生长。 优点： 每个细胞生理特性基本一致，对病毒易感性相等 无个体差异，准确性和重复性好 可严格执行无菌操作 细胞培养本身就能显示病毒的生长特征 应用空斑技术可进行病毒的克隆化;原代细胞（primary cell） 动物组织经胰蛋白酶消化处理，使细胞分散而得到的细胞。 二倍体细胞株（diploid cell strain） 将长成单层的原代细胞消化分散成单个细胞，继续培养传代，其染色体数与原代细胞一样，保持其二倍染色体数目的细胞，称为二倍体细胞。 传代细胞系（established cell line）能在体外持续增殖传代的细胞，大多数由癌细胞或二倍体细胞突变而成。;（二）细胞培养的方法;悬浮培养（suspensive culture） 通过搅拌使细胞处于悬浮状态，并补充营养和校正pH，使之生长或维持存活。 微载体培养（micro-carrier culture） 是在悬浮培养的基础上，结合微载体的细胞培养技术。 微载体是直径100~35μm的微小颗粒，对细胞无毒性，细胞可贴附其上长成单层。;第二节 病毒与细胞的相互作用;生产性感染（productive），病毒感染后能产生和释放子代病毒颗粒。宿主细胞感染病毒发生的变化可能是细胞死亡或细胞转化 非生产性感染（nonproductive）或称顿挫感染（abortive infection） 病毒感染后不形成完整的病毒颗粒 持续性感染（persistent infection）是指持续长时间的感染，感染过程中不形成感染性的病毒颗粒 ;病毒与细胞的相互作用 ; 一、病毒引致的杀细胞变化;;tissue culture cells;epithelial cells ;fibroblastic cells;Formation of multinucleated cells. ;能够使半数组织细胞在一定条件下发生细胞病变的病毒量。用于判定病毒的毒力。;涉及细胞膜的CPE 有囊膜的病毒出芽过程中能将其融合蛋白直接插入宿主细胞膜，结果导致膜融合以及合胞体（syncytia）形成。 慢病毒、副粘病毒、麻疹病毒、肺病毒、某些疱疹病毒等感染 涉及细胞骨架的CPE 微丝（如actin）、中介丝（如vimentin）及微管（如tubulin）等细胞骨架与细胞结构的完整性、物质运输及运动性等有关。;病毒引致的细胞凋亡与坏死 坏死???necrosis）、 凋亡（apoptosis） ;病毒感染抗体依赖的增强作用（Antibody-dependent enhancement of viral infection, ADE） 在病毒感染过程中，宿主产生的抗体与病毒结合，非但未能阻断病毒吸附宿主细胞，反而增强了病毒对细胞的感染，提高了病毒的滴度。 ;（一）空斑试验;空斑是由一个感染性病毒粒子复制形成的，类似于细菌的菌落，称为空斑形成单位（PFU）。病毒悬液中的感染性病毒量以每毫升含有的PFU来表示。 ;空斑试验的用途：;（二）包涵体（inclusion body);图324-4 疱疹病毒的包涵体;包涵体的性质;定义：由病毒或诱生剂刺激机体细胞产生的具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用的糖蛋白。 种类：α、β、γ干扰素。 抗病毒作用：干扰素不直接作用于病毒，而是作用于邻近的细胞，使其产生抗病毒蛋白，这些抗病毒蛋白降解病毒mRNA、抑制蛋白合成。 干扰素作用具有宿主特异性，而无病毒特异性。;干扰素抗病毒机制 ;RNA干扰（RNA interference, RNAi）指细胞利用内源或外源的小分子双股RNA片段，特异性地降解同源基因的mRNA，从而导致靶基因转录后的基因沉默（post translational gene silence, PTGS）的现象。 ;复习思考题;第五章 病毒的致病机理 ;病毒的持续性感染 类型; 一、病毒引致的杀细胞变化;fibroblastic cells;Formation of multinucleated cells. ;涉及细胞膜的CPE 有囊膜的病毒出芽过程中能将其融合蛋白直接插入宿主细胞膜，结果导致膜融合以及合胞体（syncytia）形成。 慢病毒、副粘病毒、麻疹病毒、肺病毒、某些疱疹病毒等感染 涉及细胞骨架的CPE 微丝（如actin）、中介丝（如vimentin）及微管（如tubulin）等细胞骨架与细胞结构的完整性、物质运输及运动性等有关。;干扰素抗病毒机制