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第一节 病毒的培养;动物接种:;可采用绒毛尿囊膜、尿囊腔、羊膜腔接种。;人或动物细胞在一定条件下可在实验室的培养瓶内生长。
优点:
每个细胞生理特性基本一致,对病毒易感性相等
无个体差异,准确性和重复性好
可严格执行无菌操作
细胞培养本身就能显示病毒的生长特征
应用空斑技术可进行病毒的克隆化;原代细胞(primary cell) 动物组织经胰蛋白酶消化处理,使细胞分散而得到的细胞。
二倍体细胞株(diploid cell strain) 将长成单层的原代细胞消化分散成单个细胞,继续培养传代,其染色体数与原代细胞一样,保持其二倍染色体数目的细胞,称为二倍体细胞。
传代细胞系(established cell line)能在体外持续增殖传代的细胞,大多数由癌细胞或二倍体细胞突变而成。;(二)细胞培养的方法;悬浮培养(suspensive culture) 通过搅拌使细胞处于悬浮状态,并补充营养和校正pH,使之生长或维持存活。
微载体培养(micro-carrier culture) 是在悬浮培养的基础上,结合微载体的细胞培养技术。
微载体是直径100~35μm的微小颗粒,对细胞无毒性,细胞可贴附其上长成单层。;第二节 病毒与细胞的相互作用;生产性感染(productive),病毒感染后能产生和释放子代病毒颗粒。宿主细胞感染病毒发生的变化可能是细胞死亡或细胞转化
非生产性感染(nonproductive)或称顿挫感染(abortive infection) 病毒感染后不形成完整的病毒颗粒
持续性感染(persistent infection)是指持续长时间的感染,感染过程中不形成感染性的病毒颗粒 ;病毒与细胞的相互作用
; 一、病毒引致的杀细胞变化;;tissue culture cells;epithelial cells ;fibroblastic cells;Formation of multinucleated cells. ;能够使半数组织细胞在一定条件下发生细胞病变的病毒量。用于判定病毒的毒力。;涉及细胞膜的CPE 有囊膜的病毒出芽过程中能将其融合蛋白直接插入宿主细胞膜,结果导致膜融合以及合胞体(syncytia)形成。
慢病毒、副粘病毒、麻疹病毒、肺病毒、某些疱疹病毒等感染
涉及细胞骨架的CPE 微丝(如actin)、中介丝(如vimentin)及微管(如tubulin)等细胞骨架与细胞结构的完整性、物质运输及运动性等有关。;病毒引致的细胞凋亡与坏死
坏死???necrosis)、 凋亡(apoptosis) ;病毒感染抗体依赖的增强作用(Antibody-dependent enhancement of viral infection, ADE) 在病毒感染过程中,宿主产生的抗体与病毒结合,非但未能阻断病毒吸附宿主细胞,反而增强了病毒对细胞的感染,提高了病毒的滴度。 ;(一)空斑试验;空斑是由一个感染性病毒粒子复制形成的,类似于细菌的菌落,称为空斑形成单位(PFU)。病毒悬液中的感染性病毒量以每毫升含有的PFU来表示。 ;空斑试验的用途:;(二)包涵体(inclusion body);图324-4 疱疹病毒的包涵体;包涵体的性质;定义:由病毒或诱生剂刺激机体细胞产生的具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用的糖蛋白。
种类:α、β、γ干扰素。
抗病毒作用:干扰素不直接作用于病毒,而是作用于邻近的细胞,使其产生抗病毒蛋白,这些抗病毒蛋白降解病毒mRNA、抑制蛋白合成。
干扰素作用具有宿主特异性,而无病毒特异性。;干扰素抗病毒机制 ;RNA干扰(RNA interference, RNAi)指细胞利用内源或外源的小分子双股RNA片段,特异性地降解同源基因的mRNA,从而导致靶基因转录后的基因沉默(post translational gene silence, PTGS)的现象。 ;复习思考题;第五章 病毒的致病机理 ;病毒的持续性感染 类型; 一、病毒引致的杀细胞变化;fibroblastic cells;Formation of multinucleated cells. ;涉及细胞膜的CPE 有囊膜的病毒出芽过程中能将其融合蛋白直接插入宿主细胞膜,结果导致膜融合以及合胞体(syncytia)形成。
慢病毒、副粘病毒、麻疹病毒、肺病毒、某些疱疹病毒等感染
涉及细胞骨架的CPE 微丝(如actin)、中介丝(如vimentin)及微管(如tubulin)等细胞骨架与细胞结构的完整性、物质运输及运动性等有关。;干扰素抗病毒机制
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