微生物快速检测方法.pptxVIP

微生物快速检测方法简介;常见微生物检测项目;传统计数改良法 1、培养膜法 2、螺旋平板计数法：螺旋接种仪＋菌落计数 3、滤膜法：常用于一些可过滤样品的检测 快速检测的新方法 1、ATP生物荧光法 2、电阻抗法 3、颜色变化 4、流式细胞技术及激光扫描技术 5、其它：热量法，放射测量法;培养膜法_快速检测纸片技术;培养膜法_快速检测纸片技术;培养膜法_快速检测纸片技术;霉菌和酵母菌计数 　测试片中加入的抗生素，可以抑制细菌生长；指示剂使酵母菌易认别计数；霉菌可产生特有的色泽。 金黄色葡萄球菌 　使用了具有热稳定的核酸酶反应片，核酸酶反应产生的粉红色环带色围着一个红色或兰色菌落即为金黄色葡萄球菌，26小时可确认结果。;螺旋平板法;原理 　 样品制备的菌悬液在琼脂表面形成阿基米德螺旋型轨迹。 当用于分液的空心针从平板中心移向边缘时，菌液体积减 少，注入的体积和琼脂半径间存在指数关系。培养时菌落 沿注液线生长。用一计数的方格来校准与琼脂表面不同区域有关的样品量，计数每个区域的已知菌落数，在计算细菌浓度。 ;;优点 与传统方法相比，无需稀释梯度，每个梯度倒2个平板，节省了大量人力物力。 缺点 检测时间并没有缩短，菌落总数仍需要培养48小时。 需要配合自动菌落计数仪，否则人工计数更麻烦。;滤膜法;ATP生物荧光法;10秒获得结果;ATP法检测成品的优缺点 优点：大大缩短库存时间，减少物流压力和成本。 缺点：ATP方法需要消耗大量的较昂贵的试剂，对仪器的清洗保养要求特别高。另外，有存在假阴性的可能。;电阻抗法测定细菌总数;　　M=(R0-RT)/R0×100% 其中R0表示开始时培养基的阻抗值 　　RT表示任意时刻培养基的阻抗值 　　M表示培养基电阻减少的百分数。 电阻越小细菌活动越多，在一定范围内，菌落形成单位的对数Log(CFU)与IDT（阻抗检测时间）呈直线关系。;优缺点： 电阻抗法较省力，样品细菌数在4～18小时内出结果。但对于菌数太低的不好，样品中还不能用防腐剂，否则结果是乱七八糟的。 电阻抗法制作标准曲线过程中工作量较大，但以后的检测简便的多，不需要一系列稀释，只需样品1ml，???养基9ml，测量管一只。;通过颜色变化检测;梅里埃的BacT/Alert微生物检测仪;流式细胞技术 ;FOSS公司BactoScan FC牛奶中总菌数快速检测仪 采用流式细胞原理。对微生物进行核酸染色，用流式细胞技术进行计数。 优点：速度快(50-150样品/小时) 缺点：死活细胞一起检测，消耗成本较高，仪器比较难保养。灵敏度不够高。 适合牛奶企业检测原奶中细菌总数。;美国Chemunex公司微生物快速检测系统 将流式细胞技术与活细胞荧光探针标记及激光扫描技术相结合，推出的最新一代的速度更快的Bactiflow以及更高端的ScanRDI和D-count微生物快速检测仪。 其最大的特点是只检测活细胞数，速度极快，处理量大。 检测步骤：1、过滤；2、标记，直接对活细胞和酵母进行标记；3、激光扫描。 ;三种型号的差异;　利用细菌生长时产生热量的原理设计而成。微生物在生长和代谢的过程中，能产生大量的代谢热。由于各种微生物的代谢产物热效应不同，因此可显示出特异性的热效应曲线图。热效应曲线图的形成，是由于培养基含有多种成分，微生物则产生多种不同的代谢产物，以此表现出的热效应为多个曲线峰，如为单一营养成分，则只有一个峰出现。 　在细菌生长的过程中，用微量量热计测量产热量等热数据，经计算机处理，绘制成以产热量对比时间组成的热曲线图，以此推断细菌存在数量。;发射测量法;致病菌快速检测方法;显色培养基法;酶联免疫技术—mini-Vidas全自动免疫分析仪;分子生物学方法;优缺点 分子生物学方法检测致病菌，特异性较强，技术较为前沿，特别是相对国标方面来说。 假阳性概率仍然较高，因此只能作为一种初筛方法。 速度方面：仍然需要增菌，一般是第二天出结果，与免疫法比没有速度优势。 目前不少产品已经通过AOAC的认证。;常见微生物检测项目;螺旋平板法;ATP生物荧光法;流式细胞技术 ;　利用细菌生长时产生热量的原理设计而成。微生物在生长和代谢的过程中，能产生大量的代谢热。由于各种微生物的代谢产物热效应不同，因此可显示出特异性的热效应曲线图。热效应曲线图的形成，是由于培养基含有多种成分，微生物则产生多种不同的代谢产物，以此表现出的热效应为多个曲线峰，如为单一营养成分，则只有一个峰出现。 　在细菌生长的过程中，用微量量热计测量产热量等热数据，经计算机处理，绘制成以产热量对比时间组成的热曲线图，以此推断细菌存在数量。;致病菌快速检测方法