药物的含量测定与分析方法验证教学PPT课件.ppt

* 硅胶基质键合相的稳定性与硅胶和键合相类型、流动相PH、缓冲盐及有机溶剂性质有关。温度的增高、 PH值的降低、流动相中含水量的提高会使硅胶上的Si-O- Si键水解，因而使键合相流失。 优点：柱效高 缺点：对流动相PH值范围及组成有一定限制（通常为PH=2～8）。 * 2.硬胶主要用于离子交换和尺寸排阻色谱中，它由聚苯乙烯与二乙烯苯基交联而成。可承受压力上限为3.5?108Pa。固定相按孔隙深度分类，可分为表面多孔型和全多孔型固定相。 * 流动相 （1）溶剂对于待测样品，必须具有合适的极性和良好的选择性。 （2）溶剂与检测器匹配。 高效液相色谱中流动相是液体，它对组分有亲合力，并参与固定相对组分的竞争，因此，正确选择流动相直接影响组分的分离度。 对流动相溶剂的要求： * （3）高纯度 不纯的溶剂会引起基线不稳，或产生“伪峰”。 （5）低粘度（粘度适中） 若使用高粘度溶剂，势必增高压力，不利于分离。常用的低粘度溶剂有丙酮、甲醇和乙腈等；但粘度过低的溶剂也不宜采用，例如戊烷和乙醚等，它们容易在色谱柱或检测器内形成气泡，影响分离。 （4）化学稳定性好 * 7.分类 根据分离机制不同，液相色谱可分为： 液固吸附色谱 分配色谱 化合键合色谱 离子交换色谱 分子排阻色谱等类型。 第四章：药物的含量测定与分析方法的验证 第一节：定量分析方法的分类 * 三、色谱分析法 （一）HPLC法 （1）内标法加校正因子测定供试品中主成分含量 对照品+内标物→对照溶液，进样，测定，计算校正因子 供试品+内标→供试品溶液，进样，测定供试品和内标物质的峰面积或峰高，计算含量 3. 含量测定法 （2）外标法测定供试品主成分含量 供试品→供试品溶液 对照品→对照品溶液 进样，测定，计算含量 缺点：不易准确控制进样量，宜用定量环进样 第四章：药物的含量测定与分析方法的验证 第一节：定量分析方法的分类 * 三、色谱分析法 （二）GC法 1. 对GC仪器一般要求 载 气：氮气 色谱柱：填充柱或毛细管柱 填充柱：内径2～4mm，长1～10m，内装吸附剂 高分子多孔小球或涂渍固定液的载体 毛细管柱：内径0.2～0.5mm，长10～100m，一 般为空心柱，内壁或载体经涂渍或交联 固定液 检测器：氢火焰离子化检测器 色谱图：30分钟内记录完毕 色谱适用性实验、测定法：同HPLC P169 第四章：药物的含量测定与分析方法的验证 第二节：药物分析方法验证 * 均需对分析方法进行验证 验证内容：准确度、精密度、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性 目的：证明采用的方法适合于相应检测要求。 起草药品质量标准 生产工艺变更 制剂组分改变 原分析方法修订 P169,表4-3 第四章：药物的含量测定与分析方法的验证 第二节：药物分析方法验证 * 一、准确度 是指用该方法测定结果与真实值接近的程度， 一般用回收率表示 （一）含量测定方法的准确度 1. 原料药：可用对照品进行测定；或与已知准确度的另一方法测定的结果进行比较（加入量即为已知方法的测得量）。 2. 制剂：考察其他组分和辅料对回收率的影响 ①用含已知量被测物的制剂各组分混合物（包括制剂辅料）进行测定，回收率计算同原料药 ②向制剂中加入已知量的被测物进行测定（加样回收率）P170 （二）具体做法：测定高、中、低三个浓度，n=3, 共9个数据来评价回收率；用UV和HPLC法时，一般回收率可达98.0%～102.0%；容量法可达99.7%～100.3% 回收率试验　精密称取盐酸小檗碱约40mg ，按处方比例加入 其它组分和辅料，用适量沸腾的 0. 05mol/L H2SO4 溶解。放冷 置室温，定量转移至250ml 量瓶中，并稀释至刻度。过滤，弃 去初滤液，取续滤液 5.00ml 于100ml 量瓶中并稀释至刻度， 按所选定的方法计算回收率。测定结果见下表。 三波长分光光度法测定连蒲双清片中盐酸小檗碱的含量 回收率试验　取连蒲双清片粉适量（约相当于盐酸小檗碱40mg) ，精密称取，精密加入盐酸小檗碱约40mg ，用0.05mol/L H2SO4 溶解。放冷置室温，定量转移至250ml 量瓶中，并稀释 至刻度。过滤，弃去初滤液，取续滤液 5.00ml 于100ml 量瓶 中定容，按所选定的方法计算回收率。测定结果见下表。 三波长分光光度法测定连蒲双清片中盐酸小檗碱的含量 第四章：药物的含量测定与分析方法的验证 第二节：药物分析方法验证 * 二、精密度 2. 相对标准偏差(RSD) 1.