柑橘试管内微芽嫁接方法探讨.doc

柑橘试管内微芽嫁接方法探讨 刘文龙李进进 陈升云崔华东 李志龙 李果安 黄维淸 吴锦强陈永炽李海滔卢欣 （广东轻工职业技术学院食殆系园林工程专业，广东广州510300） 摘要：冃的：通过试管内微芽嫁接获得无病毒柑橘种苗。方法：用酸橙种子经消毒后在试管 内播种作为砧木来源，釆用还没有自剪的优良柑桔品种的嫩梢，取其一定大小的茎尖作为接 穗进行试管内嫁接。结果：在种子消毒过程中，用75%酒精10s+ NaClO 8min+HgC12 lOmin 的效果明显比其它三种消毒方法污染率低；在接种过程中，去除外壳的种子萌芽率最高；接 穗的消毒用NaClOlOmin+IlgCLSmin的消壽方法污染率较低。结论：茎尖微芽嫁接技术若与 柑橘常规育种、体细胞杂交等技术结合起来，在柑橘种苗生产中将会发挥越来越大的作用。 关键词：柑橘;接穗；微芽嫁接 柑橘病毒病及类病毒病的危害很大，已蔓延于全世界，冃前经止式鉴定已确认有15—20 种此类病害。广东省汕头地区的械柑、蕉柑，每年因黄龙病枯死40万株；裂皮病己在四川、 湖南、广西、广东、浙江、福建、湖北蔓延；青果病在广西亦很猖獗。 我国于70年代初对茎尖组织培育进行了初步实验，为防止柑桔病毒危害提供了有效途 径。采用离体培养与嫁接结合的茎尖微芽嫁接技术可排除病毒培育无病毒苗木，其步骤是： 砧木试管内播种——茎尖微芽嫁接——嫁接苗试管培养——移栽或转接——转接苗培育 ——脱病毒结果鉴定。“微芽嫁接”是现今解决这一难题的一个最有效的途径Z-,本实验 对这一技术进行了研究和探讨。 1-材料与方法 实验材料与试剂 （1） 实验材料：酸橙种子；柑桔嫩芽。 （2） 实验试剂（消毒剂）:酒精75%； NaClO 2% （体积比）;HgCl2 lmg/L （以下免浓度 及单位） 2实验方法 培养基的制备 （1）培养基母液的配制 用于植物组织培养的培养基中，要求含有各种无机盐、有机物和植物激素等成分，如果 每次配培养基都逐个地称量则很浪费时间，而且有些成分用量极少，称量极小的重量既浪费 时间，乂不准确。因此，在配置培养基时，为了方便和减少误差，首先把培养基中的齐种成 分配成一定浓度的溶液，即培养基母液，然后根据培养基配方、母液浓度和需要配制培养慕 的体积来计算所需付液的体积，用量筒和取样器量取即可。 以下为大量元索、微量元素、有机成分的组成及配比： 大量元素的配比（10XMS ） 无机盐 取量 KNO：i 19g num 16. 5g MgSO4 ? 7H20 3. 7g kh2po, 1. 7g 以上置入500ml烧杯中，充分溶解。而CaCl2 -2H2O 4. 4g 或无水CaCl? 3. 31g 充分溶解后倒入上述溶液屮定容成1000ml即成lOXMSo 有机成份配比（100X ） 有机盐 取量 肌醇 5000mg 廿氨酸 lOOmg 烟酸 25mg VB, 25mg vb6 25mg 配成500ml成100X有机母液 微量元素配比（100X） 取量2230mg 或 取量 2230mg 或 1690mg 860mg620mg MnS0.i ? 4H20 或 MnSOi ? H20 ZnSO, - 7H20 h3bo. KI 83mg NaMo04 ? 2 H20 25mg CuSOi- 5 ILO 2. 5mg C（）C12 ? 6H20 2. 5mg （2）培养基的配制 玻璃器皿充分清洗一干燥 I 量取母液f加入3%的蔗糖-定溶-pH调整（5. 6-5.8）-煮沸- 加入琼脂一分装- 灭菌 -冷却一凝固一接种（嫁接） 122种子的消毒及接种 选取饱满的酸橙种子用酒精、NaClO. IIgCl2进行了不同消毒时间的对比实验。消毒方法 有： （1） 酒精 10s+NaC10 10min+HgCl2 8min （2） 酒精 10s+ NaClO 10min+HgCL 12min （3） 酒精 10s+ NaClO 8min+HgCl2 8min （4） 酒精 10s+ NaClO 8min+IIgCl2 lOmin 用铁子将消毒好的种子接种到已准备好的培养基中，注意接种时，使培养瓶成一定的倾 斜度，使手拿银子的接种过程不直接在培养基上方进行，以减少污染机会。为了能让种子有 足够的空间生长，每瓶接种3粒，尽量避免把种子埋于培养基内。然后将培养瓶放置于培养 架上培养，条件：23°C-25°C,遮光培养，直到萌发时再置于光照下。 1.2.3种子接种时不同的处理形式 为了提高种子萌芽率，我们对种子采用了三种接种处理方式： （1） 不做任何处理； （2） 刨去外部硬核 （3） 使用种胚 1.2.4微芽嫁接方法 选取还没有自剪的优良观赏柑桔品种嫩芽作为材料，切取约0. 7mm的茎尖进行嫁接。 （1）选取生长健壮的嫩芽用自来水冲洗干