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实验二十 叶绿素含量的测定
叶绿素的含量与植物光合作用及氮素营养有密切的关系, 在科学施肥、 育种及植物病理研
究上常有测定的需要。
方 法 Ⅰ
一、 目的
掌握叶绿素含量测定的基本原理和方法。
二、原理
叶绿素与其他显色物质一样, 在溶液中如液层厚度不变则其吸光度与它的浓度成一定的比
例关系。已知叶绿素 a 、b 在 652 nm 波长处有相同的比吸收系数(均为 34.5 )。因此,在此波
长下测定叶绿素溶液的吸光度,即可计算出叶绿素 a 、b 的总量。
三、材料、仪器设备及试剂
1. 材料: 菠菜叶;芥菜叶或其他植物叶片。
2. 仪器设备: 电子分析天平;分光光度计;漏斗; 25ml 容量瓶;剪刀;滤纸;玻棒等。
3. 试剂: 95 ﹪乙醇、石英砂、碳酸钙粉。
四、实验步骤
1. 叶绿素的提取
称取植物鲜叶 0.20g (可视叶片叶绿素含量增减用量) ,剪碎放入研钵中, 加少量碳酸钙粉
和石英砂及 3~5ml95 ﹪乙醇研成匀浆, 再加约 10ml 95 ﹪乙醇稀释研磨后, 用滤纸过滤入 25ml
容量瓶中,然后用 95 ﹪乙醇滴洗研磨及滤纸至无绿色为止,最后定容至刻度,摇匀,即得叶
绿素提取液。
2. 测定
取光径为 1cm 的比色杯,倒入叶绿素提取液距杯口 1cm 处,以 95 ﹪乙醇为空白对照,在
652 nm 波长下读取吸光度( A )值。
五、计算
将测得的吸光度 A 652 值代入公式 (1), 即可求得提取液中叶绿素浓度。 所得结果再代入公式
- 1
(2) ,即可得出样品中叶绿素含量( mg ·g Fw )。
A 652
- 1
C ( mg ·ml ) = ———— ……………………………………………………( 1)
34.5
公式中: C — 叶绿素 (a 和 b )的总浓度 ( mg ·ml- 1 )
50
A 652 — 表示在 652nm 波长下测得叶绿素提取液的吸光度
34.5 为叶绿素 a 和 b 混合溶液在 652nm 波长的比吸收系数(比色杯光径为 1cm, 样
- 1
品浓度为 1g ·L 时的吸光度) 。
C (mg ·ml- 1) × 提取液总量( ml )
- 1
叶绿素含量( mg ·g Fw )= ———————————————— ……( 2)
样品鲜重( g )
方 法 Ⅱ
一、 目的
掌握叶绿素 a、b 含量测定的基本原理和方法。
二、原理
叶绿素 a、b 分别在 663nm 和 645nm 波长处有最大的吸收峰,同时在该波长处叶绿素 a.、
b 的比吸收系数 K 为已知,我们即可以根据 Lambert - Beer 定律,列出浓度 C 与吸光度 A 之
间的关系式:
A 663 = 82.04 Ca + 9.27C b ………………
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