K402 农产品快速检测 W6-4 花生油黄曲霉毒素B1家庭快速检测 W6-4-3 花生油黄曲霉毒素B1家庭快速检测-微教材.docx

农产品/食品快速检测教学资源库 PAGE \* Arabic 2 / NUMPAGES \* Arabic 5 《食用农产品的家庭快速检测》专题-微教材 微课编号及名称 W6-4花生油黄曲霉毒素B1家庭快速检测 微课形式 动画、现场实录 教学设计模式 任务驱动法 教学目标 了解黄曲霉毒素相关知识和胶体金免疫层析检测原理； 学会样品处理和胶体金免疫层析快速检测方法 。 教学内容 涵盖知识 涵盖技能 黄曲霉毒素相关知识； 胶体金免疫层析检测黄曲霉毒素原理。 样品处理和胶体金免疫层析快速检测操作。 黄曲霉毒素之问 1、什么是黄曲霉毒素？ 黄曲霉毒素（AF）是一类主要由黄曲霉和寄生曲霉产生的次级代谢产物，是目前为止发现的毒性最大的真菌毒素，其毒性相当于氰化钾的10倍，砒霜的68倍。目前确定的黄曲霉毒素有18种，分为B类，G类和M类。B代表蓝色，因为它在紫外光的照射下会发出蓝色荧光。其中毒性最强的是 “B1”。 G类的黄曲霉毒素在紫外光下因发出黄绿色荧光而得名。B1 、B2和G1、G2，就是经常出现在农产品中的黄曲霉毒素的代表。B1和B2被奶牛吃了之后，分别有一小部分会转化为M1和M2进入牛奶中。这就是牛奶中黄曲霉毒素的来源，M就是“milk”的意思。 2、黄曲霉毒素有毒，如果食用了会对人体产生什么危害呢？ 黄曲霉毒素已经被世界卫生组织的癌症研究机构划定为1类致癌物，主要对人及动物的肝脏组织造成损害。急性中毒会有急性肝炎、出血性坏死等表现。慢性中毒则会有肝实质细胞变性、肝硬化等肝脏慢性损伤。同时黄曲霉毒素还会诱发多种癌变，像是肝癌。甚至会出现畸胎。 3、生活中哪些食品容易被黄曲霉毒素污染？ 黄曲霉毒素的污染相当广泛，包括谷物、坚果和籽类以及牛乳、食用油等，尤以玉米、花生被污染的程度最严重。新闻报道中花生油黄曲霉毒素超标主要的原因就是花生原料在种植、采收、运输及储存过程中受了到黄曲霉等霉菌污染，企业在生产时也没有严格挑拣花生原料和进行相关检测，其他还有没有采用精炼工艺或工艺控制不当等原因。 4、生活中我们该如何预防黄曲霉毒素的污染呢？ 生活中，预防黄曲霉毒素污染有两种：一是防霉，二是去毒。把粮食的含水量控制在12~13%以下就可以防霉;使用化学熏蒸剂，对防止霉菌侵染也有一定作用。去毒的方法，玉米可用脱胚去毒法，植物油可用加碱去毒法等。此外，紫外线照射、盐炒法等也有一定去毒效果。 5、我们国家现在对食品中黄曲霉毒素B1限量有什么规定？ 在 GB 2761—2011食品安全国家标准——食品中真菌毒素限量中规定如表1，其中花生油、玉米油中黄曲霉毒素B1 限量指标为20μg /kg。 6、我们在家中有什么方法可以快速检测出花生油中的黄曲霉毒素B1是否超标吗？ 目前，测定食品中的黄曲霉毒素的方法有薄层层析法、液相色谱法、酶联免疫法、胶体金免疫层析法等。其中，胶体金免疫层析法快速、简便、直观，比较适合在家中进行快检。 7、胶体金免疫层析法检测黄曲霉毒素B1原理是什么？ 采用AFB1胶体金免疫试纸条对黄曲霉毒素B1进行检测采用了竞争法原理，如下图。当被检物质溶液中不含AFB1 ，即阴性时，金标抗AFB1 单抗的反应位点便会被检测线处的偶联抗原AFB1-BSA识别并被结合，因而被截留在该处，当累积到一定程度便在此处出现红色线。当被检物质溶液呈弱阳性时会出现反应强度减弱的检测线。当被检物质溶液中AFB1 的浓度达到一定时，AFB1 就会把金标抗AFB1 抗体的反应位点全部结合，这样当免疫胶体金到达检测线时便不能再与偶联抗原AFB1-BSA发生反应，因而也就不出现红色线。 无论被检测物质中有无AFB1，金标抗AFB1 单抗都会与喷涂在质控线处的AFB1二抗发生免疫反应，即在质控区会出现一条红色线，否则，试纸条无效。 8、胶体金免疫层析法检测黄曲霉毒素B1操作步骤如何？ 首先进行样品的前处理。准确称取5.0g有代表性的试样于50mL离心管中； 配制80%甲醇-水溶液50mL于试剂瓶中； 根据试剂盒检测限，量取40mL80%甲醇-水溶液加入试样管中； 振荡3min； 配平后 4000r/min离心5min以获取上清液； 吸取少许上清液滴至pH试纸上观察pH，如果提取后上清液pH＜5时，用2M NaOH溶液调pH至7.0-8.0后再进行稀释检测。 取上清100μL，加入样品稀释液200μL，混匀，待检。 从包装袋中取出检测条，将所需微孔试剂置于空微孔板架中；注意在检测前需将试剂盒和待检样本溶液恢复至室温；打开微孔试剂时，轻轻揭开密封膜，切勿用力过猛以免有粉末飞出；检测条打开后要在一个小时内使用。 用移液器吸取待检样品溶