水产微生物 实训一 微生物检测实验室常用仪器和器具的认识 技能实训 玻璃器皿的准备.doc

技能实训 玻璃器皿的准备 1. 常用玻璃器皿的洗涤 微生物实验对玻璃器皿的清洁程度有较高的要求，各种器材不仅要求达到生物学清洁，还需达到化学清洁。器材如不能达到生物学清洁，常常会发生各种污染，导致结果错误。若不能达到化学清洁，则常可影响培养基的pH值，甚至由于某些化学物质的存在可抑制微生物的生长，也可影响血清学反应的结果，如在pH＜3时可发生酸凝集。因此，玻璃器皿的工作清洁不容忽视。 （1）洗涤剂的种类及应用 ① 水 水是最重要的洗涤剂，但只能洗去可溶解于水的沾污物。油、蜡等不溶于水的沾污物则必须用其他方法处理后再用水洗。对于要求无杂质颗粒或无机盐离子的玻璃器皿，在用清水洗过后，应再用蒸馏水进行漂洗。 ② 肥皂 有油污的器皿，通常用湿刷子涂抹一些肥皂后，刷洗器具，再用水清洗。用5%热肥皂水去油污能力也很强。 ③ 洗衣粉 洗衣粉有很强的去污、去油能力。用1%的洗衣粉溶液洗涤玻璃器皿，特别是洗涤带油的载玻片和盖玻片，如果加热煮沸则有很好的清洁效果。 ④ 去污粉 主要作用是摩擦去污，也有一定的去油污作用，用时先将器具湿润，再用湿布或湿刷子沾上去污粉擦拭去污垢，然后用清水洗掉去污粉。 ⑤ 洗涤液 重铬酸钾(或重铬酸钠)的硫酸溶液是一种去污能力很强的强氧化剂，常用于玻璃或搪瓷器皿上污垢或有机物的清洗，但不能用于金属器皿。配好的洗涤液可多次使用，每次用完后倒回原瓶中保存，直至溶液变为青褐色时才失去效用。使用洗涤液应尽量避免混入水分稀释。将洗涤液加热至40℃～50℃ 洗涤液具有强腐蚀性，溅在桌椅上，应立即用水洗并用湿布擦拭，皮肤及衣服上沾有洗涤液时，应立即用水冲洗，然后用苏打（碳酸钠）水或氨水洗去洗涤液。 ⑥ 浓硫酸与强碱液 器皿上如沾有煤膏、焦油及树脂类物质，可用浓硫酸或40%氢氧化钠溶液浸洗，处理所需时间随所沾物质的性质而定，一般只需5～10min，有的需数小时。 ⑦ 有机溶剂 有时洗涤浓重的油脂物质及其他不溶于水也不溶于酸或碱的物质，需要用特定的有机溶剂。常用有机溶剂有汽油、丙酮、酒精、苯、油镜洗液及松节油等，可根据具体情况选用。 （2）常用玻璃器皿的清洗方法 玻璃器皿的清洗是微生物培养中工作量最大、质量要求最严格的步骤。清洗后的玻璃器皿不仅要求干净透明、无油迹，而且不能残留任何物质，最终冲洗后器皿内外应无水珠积聚。不同玻璃器皿的清洗方法如下： ① 新玻璃器皿 新玻璃器具因含有游离碱，初次使用前先用洗衣粉或水洗净，然后用2%稀盐酸浸泡数小时，取出后再用清水冲洗干净。 ② 带油污的玻璃器皿 沾有凡士林或石蜡，未曾污染菌的玻璃器皿，尽可能除去油污，可先在50g／L的碳酸氢钠液内煮两次，再用肥皂和热水洗刷。 ③ 带菌的玻璃器皿 盛过培养基的玻璃器皿，应先将培养物倒入或刮入废物缸中，另行处理。如果器皿内的培养基已经干涸，可将器皿放在水中浸泡数小时或煮沸，将干涸物倒出后再行洗涤。带有对人有致病作用的培养物需经煮沸灭菌或121℃ 经这样洗涤过的器皿，可用于盛培养基和无菌水等。如盛化学药剂(试剂)或用于较精确的实验，则在用自来水冲洗之后，还要用蒸馏水淋洗3～4次，烘干备用。 ④ 移液管的洗涤 吸取过一般液体的移液管，用后浸没在盛有清水的容器内，切勿使管内物干燥。吸过菌液的移液管，先浸入3%来苏水或5%石炭酸溶液内浸泡数小时或浸泡过夜，经高压蒸汽灭菌后，再用自来水及蒸馏水冲净；吸过有油脂液体的移液管，应先浸入10%氢氧化钠溶液中，浸1h以上，再进行清洗，如仍有油脂，则需浸入洗涤液内1h以后再洗涤。无菌操作所用过的移液管，应先用钢针将棉塞取出后再洗涤。移液管洗涤后可倒立于垫有干净纱布的容器中，待水滤干后再用，如急用可放电烤箱内60～70℃烤干备用。 ⑤ 载玻片及盖玻片的洗涤 新载玻片和盖玻片，应先在2%的盐酸溶液中浸泡1h，后用自来水冲洗，再用蒸馏水洗2～3次，也可用1%的洗衣粉液洗涤。用洗衣粉洗涤时应先将洗衣粉液煮沸，后将载片散开放入煮沸液中，持续煮沸10～15min（勿使玻片露出液面以防钙化变质）。冷却后用自来水冲洗，再用蒸馏水换洗2～3次。如用洗衣粉液洗涤新盖玻片时则只能在煮沸的洗衣粉中保持1min，待泡沫消失后再煮沸1min，如此反复2～3次（煮沸时间过长，会使盖片钙化，易碎），冷却后再用自来水冲洗，蒸馏水换洗。 已用过的带菌载玻片及盖玻片，可先浸入5%石炭酸或5%来苏水溶液中消毒，然后用夹子取出经清水冲净，最后浸入95%酒精中，用时在火焰上烧去酒精即可；或者从酒精中取出用软布擦干，保存备用；或也可烘干或晒干后放在干净的容器内或用干净纱布包好备用。 玻璃器皿的清洗应按以下流程认真执行（图1-9）。 图1-9 玻璃器皿的处理流程（引自