王福 从5-HT信号通路探讨翘芍方治疗早泄的机制.ppt

三、讨论 翘芍颗粒组成及方解； 翘芍颗粒的现代药理研究； 8-OH-DPAT造模的经验。 翘芍方 主要成分:贯叶连翘、柴胡、白芍、石菖蒲、巴戟天等 主要功效:补肾疏肝、养心固精 方解：贯叶连翘、柴胡、白芍以柔肝行气；淫羊藿、刺五加补益肾气；合欢皮、煅牡蛎、莲子心以安神固精。 君药：贯叶连翘 贯叶连翘的有效成分是贯叶金丝桃素，能抑制5-HT的摄取,是5-HT神经递质的非竞争性重吸收抑制剂，对5-HT激动剂所诱发的大鼠过快射精有延迟作用。 8-OH-DPAT早泄大鼠造模经验 与连续统一体理论筛选早泄大鼠相比，节约动物资源； 雌鼠发情是关键； 观察环境要求高：安静、密闭、光线； 时间要求高，观察时间长。 总体评价：造模稳定，具有可操作性。 谢 谢 中国中医科学院西苑医院男科 王福 从5-HT信号通路探讨翘芍方治疗早泄的机制 国家自然基金，项目编号目录 1.材料 雄性Wistar大鼠72只，12周龄，体重200～250g； 雌性Wistar大鼠45只，10周龄，体重150～180g。 由中国中医科学院西苑医院实验动物中心提供，均为清洁级，采用架式笼养, 恒温(22±1)°C ,湿度50%～60%,光照黑暗各12 h 交替,自由饮水和摄食。 2.药品 8-OH-DPAT(100mg,Sigma-Aldrich) 苯甲酸雌二醇注射液(2ml:4mg，杭州动物药品厂) 注射用青霉素钾(160万单位） 水合氯醛(国药集团化学试剂有限公司) 翘芍颗粒（8g/袋，西苑医院颗粒药房提供） 达泊西汀（30mg/片，美纳里尼(中国)投资有限公司） 3.仪器设备 高清红外夜视数码录像系统(小蚁1080P智能摄像机2)， 大鼠性行为观察箱， -80℃冷冻箱(SANYO,Japan)， 电子分析天平(sartorius,Germany)， 大鼠固定器(中国江苏)， 动物体重称(中国上海）。 1.分组及造模 随机分为6组,每组12只，用5%苦味酸溶液染色法标记大鼠编号 分组 处理方法 A组:空白对照组 大鼠不做任何处理 B组:模型对照组 8-OH-DPAT+生理盐水 C组：翘芍方低剂量组 8-OH-DPAT+翘芍方（1） D组：翘芍方中剂量组 8-OH-DPAT+翘芍方（2） E组：翘芍方高剂量组 8-OH-DPAT+翘芍方（4） F组：盐酸达泊西汀组 8-OH-DPAT+达泊西汀（按需） 2.雌鼠去势手术 目的：避免雌鼠受孕，提前摘除大鼠卵巢。 方法：大鼠术前禁食12h，4%水合氯醛1mL/100g腹腔麻醉后，俯卧位固定，剪去术区的鼠毛备皮，碘酊消毒，75%乙醇脱碘2次铺上手术孔巾，在背部肋弓下行1 cm左右，脊柱侧面1 cm处切口，逐层切开，暴露腹腔。分离性腺周围的脂肪组织，找到卵巢，结扎卵巢周围血管，切除卵巢，然后逐层缝合，同法摘除另一侧卵巢。局部碘酊消毒，肌注青霉素。 观察：监测大鼠死亡情况及术后1周的体重变化。 结果：去势后雌鼠死亡2只，其余均成功。 3.雌性大鼠发情的诱导 在交配实验前36h皮下注射苯甲酸雌二醇50μg来诱导发情。 1.性行为学观察指标 在0周、4周，将2只雌雄大鼠放在行为观察箱，每次30min，观察指标主要包括： 骑跨潜伏期(mount latency，ML) 、 插入潜伏期(intromission latency，IL)、 射精潜伏期(ejaculation latency，EL) 射精次数(ejaculation frequency，EF) 骑跨次数(mount frequency，MF) 、 插入次数(intromission frequency，IF)。 2.性行为学观察 嗅 舔 性行为学观察 插入 骑跨 大鼠性行为学特征 ML:骑跨潜伏期(mount latency) MF:骑跨次数(mount frequency) EL：射精潜伏期(ejaculation latency) IL：插入潜伏期(intromission latency) EF：射精次数(ejaculation frequency) IF：插入次数(intromission frequency) 性行为总结 8-OH-DPAT可使雄鼠骑跨潜伏期、插入潜伏期、射精潜伏期显著缩短，。 标本的收集：下丘脑 标本保存