氨基酸发酵生产技术 氨基酸菌种保藏术 氨基酸菌种扩大培养及菌种保藏技术.ppt

种子制备的技术概要 培养孢子斜面时的湿度 一般选择相对湿度为40%-50% 在种子罐中培养种子的通气量 一般情况下通气量高时种子质量较好 也有特例 斜面的保藏时间 尽量采用新鲜斜面 种子质量的控制措施 定期检验菌种的稳定性 定期进行菌种复壮(自然分离) 挑选生产能力稳定的菌种作为生产菌种 无菌检验 镜检 肉汤培养(以酚红为指示剂) 种子液划线培养 斜面培养 菌种的保藏 1、菌种保藏的意义 菌种是从事微生物学以及生命科学研究的基本材料，特别是利用微生物进行有关生产如抗生素、氨基酸、酿造等工业，更离不开菌种。所以菌种保藏是进行微生物学研究和微生物育种工作的重要组成部分。其任务首先是使菌种不致死亡，同时还要尽可能设法把菌种的优良特性保持下来而不致向坏的方面转化。 菌种的保藏 2、菌种保藏的原理 菌种保藏主要是根据菌种的生理生化特点人工创造条件使孢子或菌体的生长代谢活动尽量降低，以减少其变异。一般可通过保持培养基营养成分在最低水平缺氧状态，干燥和低温，使菌种处于“体眠”状态，抑制其繁殖能力。 一种好的保藏方法首先应能长期保持菌种原有的优良性状不变，同时还需考虑到方法本身的简便和经济，以便生产上能推广使用。 菌种的保藏 3、菌种保藏的方法 （1）斜面低温保藏法 （2）石蜡油封保藏法 （3）砂土管保藏法 （4）冷冻干燥法 （5）超低温保藏法 菌种的保藏 （1）斜面低温保藏法 将菌株接种于合适斜面培养基上，待生长好后置于4冰箱保藏，每隔一定时间进行移接培养后再将新斜面继续保藏。 这种保藏方法简单，存活率高，易于推广，经常使用的菌种可采用这种方法。其缺点是菌种仍有一定强度的代谢活动条件，保存时间不长，而且传代多，因此菌种客易产生变异。 菌种的保藏 （2）石蜡油封保藏法 将生长好的新鲜斜面在无菌条件下倒入已灭菌的液体石蜡，油层要高出斜面上端1cm，使之与空气隔绝，然后垂直放于室温或冰箱内保藏即可。 这种方法也比较简便，且保藏时间一般可长达l年以上。适于保存部分霉菌、酵母菌、放线菌，但对细菌效果较差，对某些能同化烃类的微生物则不适用。 菌种的保藏 （3）砂土管保藏法 将孢子悬浮液转移至灭过菌的砂土管中，于真空干燥器内用真空泵抽干，再转至有干燥剂的容器中，密封低温保藏。本方法是用人工方法模拟自然环境使菌种得以栖息。适用于细菌的芽孢、霉菌和放线菌孢子的保藏，不适于对干燥敏感的无芽孢的细菌和酵母菌。主要包括砂土制备和真空抽干两步。 菌种的保藏 （4）冷冻干燥法 此法的原理是在低温下迅速将细胞冻结以保持细胞结构的完整，然后在真空下使水分升华。这样菌种的生长和代谢活动处于极低水平，不易发生变异和死亡，因而能长期保存，一般为5~10年。微生物在此条件下易死亡，所以需加入一些物质作保护剂，一般常用的是脱脂牛奶、血清等。该法存活率高，变异率低，并能广泛适用于细菌（有芽孢和无芽孢的）、酵母、霉菌孢子、放线菌孢子和病毒等，因此是目前广泛采用的好方法。其缺点是手续麻烦，操作复杂，要求严格，并需有一定设备条件。 菌种的保藏 （5）超低温保藏法 由于现在超低温冰箱的使用已较普及，所以菌种的超低温保藏法在生产企业和研究机构已得到广泛应用。该方法的要点是：将要保藏的菌种置于10%甘油或二甲基亚砜保护剂中，密封于试管或安瓿管中，然后将其放入超低温冰箱中于-70℃下保藏。该法简便易行，而且保藏效果较好。 练习 1）为什么要进行种子的逐级扩大培养？什么情况下可采用一级种子(二级发酵)？ 2) 工业发酵的菌种是如何获得的，可能涉及哪些过程？ 如何操作？ 3)菌种保藏有哪些方法？ 氨基酸菌种扩大培养及菌种保藏技术 种子的扩大培养 教学目标 1) 了解种子扩大培养的概念与目的，掌握对发酵种子的要求； 2) 了解种子扩大培养的工艺技术概要； 3) 掌握接种量、种龄、发酵级数的概念； 4)掌握菌种保藏的各种方法。 种子扩大培养的目的与要求 种子制备实例 种子制备的技术概要 种子的扩大培养 种子扩大培养是指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养，最终获得一定数量和质量纯种的过程。这些纯种培养物称为种子。 种子扩大培养的概念: 种子扩大培养的目的与要求 种子扩培的目的 接种量的需要 菌种的驯化与适应 缩短发酵时间、保证生产水平 种子的要求： 总量及浓度能满足要求 个体与群体的生理状况稳定 活力强，移种至发酵后，能够迅速生长 无杂菌污染 种子扩大培养的目的与要求 种子制备过程举例 谷氨酸生产的种子制备 制备过程 斜面菌种 →一级种子培养 →二级种子培养 →发酵 种子扩大培养的目的与要求 1、斜面 (AS1.299) 培养基：蛋白胨 1%，牛肉膏1%，氯化钠 0