基因工程：基因克隆实例分析.ppt

简要步骤 1、外源片段的酶切位点分析 软件分析的结果为：没有下列酶切位点 AatII, AccI, AclI, AflII, AflIII, AhdI, AlwI, AlwNI, ApaI, ApaLI, AscI, AvaI AvrII, BaeI, BaeI, BamHI, BanI, BanII, BbsI, Bce83I, BcefI, BcgI, BcgI, BciVI，BclI, BglI, BglII, BmgI, BmrI, BplI, BplI, BpmI, Bpu1102I, BsaI, BsaAI, BsaHI，BsaWI, BsbI, BseRI, BseSI, BsgI, BsiHKAI, BsmI, BsmAI, BsmBI, BsmFI, Bsp24I，Bsp24I, Bsp1286I, BspEI, BspGI, BspLU11I, BsrBI, BsrFI, BsrGI, BssHII, BssSI，BstAPI, BstDSI, BstXI, BstYI, BstZ17I, Bsu36I, BtrI, CjeI, CjeI, ClaI, DraIII，DrdI, Eco47III, EcoNI, EcoO109I, EcoRI, EcoRV, FseI, FspI, HgaI, HgiEII, HincII，HindIII, HpaI, KpnI, MluI, MspA1I, MunI, NarI, NcoI, NgoAIV, NheI, NotI, NruI，NspI, NspV, PacI, Pfl1108I, PflMI, PinAI, PmeI, PmlI, PshAI, PsiI, Psp5II, PstI，PvuII, RcaI, RleAI, RsrII, SacI, SacII, SalI, SanDI, SapI, SbfI, ScaI, SexAI, SfcI SfiI, SgfI, SgrAI, SmaI, SmlI, SnaBI, SpeI, SphI, SrfI, Sse8647I, SspI, StuI, SunI， SwaI, TaqII, TaqII, TatI, Tth111II, XbaI, XhoI, XmnI 保护碱基的情况 2、引物设计***** 假设上下游引物分别为 上游：ATGCGATCGTGAGGCAAAG 下游：TTAAGGCGACACCATTGGTT 上下游引物应该分别添加什么酶切序列？？？ 加入保护碱基和酶切位点后，需要合成的引物是 上游：ATGAAGCTTATGCGATCGTGAGGCAAAG 下游：TGGGATCCAGGCGACACCATTGGTT 是否可行？？？ 不可行 需要添加两个额外的碱基以避免移码，若移码则GFP 不能正常表达，融合无意义 所以下游引物应作修改，改为 TGGGATCCCGAGGCGACACCATTGGTT 后续操作与前相似 基因克隆实例分析 一、将大肠杆菌染色体上基因A克隆到质粒载体pUC18上 序列如下atacaattggttatgtgttttgggggcgatcgtgaggcaaagaaaacccggcgctgaggccgggttattcttgttctctggtcaaattatatagttggaaaacaaggatgcatatatgaatgaacgatgcagaggcaatgccgatggcgatagtgggtatcatgtagccgcttatgctggaaagaagcaataacccgcagaaaaacaaagctccaagctcaacaaaactaagggcatagacaataactaccgatgtcatatacccatactctctaatcttggccagtcggcgcgttctgcttccgattagaaacgtcaaggcagcaatcaggattgcaatcatggttcctgcatatgatgacaatgtcgccccaagaccatctctatgagctgaaaaagaaacaccaggaatgtagtggcggaaaaggagatagcaaatgcttacgataacgtaaggaattattactatgtaaacaccaggcatgattctgttccgcataattactcctgataattaatccttaactttgcccacctgccttttaaaacattccagtatatcacttttcattcttgcgtagcaatatgccatctcttcagctatctcagcattggtgaccttgttcagaggcgctgagagatggcctttttctgatagataatgttctgttaaaatatctccggcctcatct