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黄芩中黄芩苷类化合物的提取、分离与鉴定 * * 水解 黄芩中黄酮类化合物的基本结构 葡萄糖醛酸 苷元 * 黄芩苷的相关特性 淡黄色的针晶，因含有-OH、-COOH而显酸性，可溶于碱性试剂中。 理化性质 药理价值 抗氧化---清除氧自由基及抗氧化作用 抗菌---对微生物的抑制作用 抗HIV---对人类免疫病毒HIV的抑制 免疫调节---对免疫功能的调节作用 张喜平，田华，程琪辉.黄芩苷的药理作用研究现状.中国药理学通报，2003,19（11）：1212～1215 * * 离心机的使用 4 3000 3 转子数 转速 时间 原理：通过离心机转子高速旋转产生的强大离心力，悬浮液与 悬浮颗粒之间因为重力的差异，而导致不同的沉降速度。 样品要对称放置 停止后才能打开 离心机使用注意 样品瓶外面无水 打开 * 第二次 下进 上出 索式提取器 结晶 * 结晶法 1.结晶法的操作 2.结晶溶剂的选择 将需要结晶处理的固体物质或粗晶加热溶解在一定量的溶剂中，制成过饱和溶液，趁热过滤，除去不溶性杂质，将滤液慢慢冷却放置，析出结晶，过滤即得。 结晶溶剂的选择是关键。 对结晶溶剂的要求：对欲纯化成分加热时溶解，冷却时析出； 对杂质则冷热都不溶或都溶； 溶剂的沸点适中； 与欲结晶的成分不发生化学反应； 尽可能安全、价廉、易得等。 常用结晶溶剂：水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、三氯甲烷等等。 * 第三次 由于上节课得到的黄芩苷结晶太少，回流这一步就暂时不做。 * 鉴 定 1.显色反应 盐酸镁粉反应：取样品少许，加稀乙醇热溶，加镁粉少许，滴加浓盐酸数滴，观察溶液颜色的变化。 三氯化铁反应：取样品少许，溶于水或乙醇中，加1%三氯化铁醇溶液一滴，观察溶液颜色的变化。 Molish反应：取样品少许置于试管中，加0.5 ml 乙醇溶解，再加入1%α-萘酚溶液数滴；然后沿管壁加入浓硫酸约0.5ml，观察两溶液界面处颜色的变化。 A B C 上节课的黄芩苷结晶 * 2.色谱鉴定 （1）样品的制备（黄芩苷的水解）： 精密称取黄芩苷约0.5g，置干燥25ml锥形瓶中，滴加蒸馏水约2ml使黄芩苷溶解，加入浓硫酸3ml，用玻棒搅拌均匀，得透明橙红色溶液。水浴加热15min左右，放冷。将此溶液在搅拌下倾入20ml冰水中，析出黄色沉淀，抽滤并用水洗涤至无酸性反应，干燥。 水解所得黄色沉淀，用氯仿反复提取，合并氯仿溶液，浓缩回收氯仿至干，残留物再用甲醇重结晶得黄色针晶，为黄芩素，供苷元的鉴定。(不做) 滤去苷元后的水溶液，加固体碳酸钡使水溶液至中性，滤去碳酸钡沉淀。滤液浓缩至2～3ml，供糖的鉴定。 * 酚羟基的 鉴别 10 mL左右 2个点 样品：水解所得糖的溶液。 对照品：葡萄糖醛酸 展开剂：正丁醇-醋酸-水（4:1:5，上层） 显色剂：苯胺-邻苯二甲酸试液 于105℃烘10min，显色。 （2）糖的纸色谱鉴定 黄芩苷的聚酰胺薄层色谱鉴定 样品：自制黄芩苷的乙醇溶液 对照品：黄芩苷对照品的乙醇溶液 展开剂：冰乙酸（6～10 mL） 显色剂：2%的三氯化铁乙醇溶液。 （3）黄芩苷的聚酰胺薄层色谱鉴定 . 样品：自制黄芩苷的乙醇溶液 . 对照品：黄芩苷对照品的乙醇溶液 . 展开剂：水：乙醇：冰乙酸（1：1：1） . 显色剂：2%三氯化铁乙醇溶液 *