黄柏中生物碱的提取、分离和纯化1.ppt

黄柏中小檗碱的提取、分离和鉴定 主要成分为小檗碱（berberine），含量为1.4—4%（川黄柏含量较高） 黄柏中主要化学成分 盐酸小檗碱:黄色针晶，难溶于冷水， 但较易溶于热水和乙醇 性状：黄色针晶 溶解性：能溶于水，在热水和乙醇 中溶解度大，难溶于丙酮、 氯仿、乙醚或苯 黄柏中小檗碱的提取分离鉴定 实验目的 1、掌握从黄柏中提取小檗碱的原理和方法 2、掌握柱色谱的基本操作方法及其在 中草药有效成分的提取分离的应用 3、掌握生物碱的鉴别方法 黄柏中小檗碱的提取分离鉴定 实验原理 小檗碱为季铵型生物碱，其游离型在水中溶解度较大，其盐酸盐在水中溶解度较小。利用小檗碱的溶解性及根据黄柏中含粘液质的特点，首先用石灰乳沉淀粘液质，用碱水自黄柏中提出小檗碱，再加盐酸使转化为盐酸小檗碱，使沉淀析出。 黄柏中小檗碱的提取分离鉴定 黄柏皮粗粉（100g） 少量多次加入120ml石灰乳拌湿，溶胀30min后,再加入8倍量水(800-1000mL)浸渍30min后渗漉 渗漉液 药渣 加入总体积10%的食盐 静置，抽滤 滤液 沉淀 （盐酸小檗碱粗晶） 黄柏中小檗碱的提取分离鉴定 提取实验（一） 渗漉 黄柏中小檗碱的提取分离鉴定 1、石灰乳用前搅拌均匀；用量少量多次，拌至不太湿 2、棉花不能太多太厚，太多太厚流速太慢，但要注意太少有药粉流出 3、药粉要层层压平，同时洗耳球敲壁，不宜太紧 4、药粉上加盖滤纸与石子，防止药面被破坏 5、加溶剂以玻璃棒引流，保证液面澄清 6、先流通后，再夹住浸渍30min，才放渗漉液，流速不能太快 7、氯化钠不能无限制的多加，加入后搅拌溶解 注意事项 黄柏中小檗碱的提取分离鉴定 沉淀 不溶物 滤液 溶于20倍量沸水中（120-150ml），趁热抽滤 加浓HCl调pH2左右，放置20min，抽滤 沉淀 用蒸馏水洗至近中性，80℃以下烘干 盐酸小檗碱 提取实验（二） 黄柏中小檗碱的提取分离鉴定 氧化铝柱色谱纯化 小檗碱（三） 实验一 黄柏中生物碱的提取分离鉴定 柱内先加入一定体积的洗脱剂(实验中使用的是乙醇)，打开活塞，放出柱内乙醇，将色谱柱下端的空气泡充分赶尽，然后再加入乙醇至距色谱柱的下端1-2cm处，关闭活塞。 取中性氧化铝（100—200目)约35g于烧杯中，加入一定体积的乙醇调成浆状，赶尽气泡，然后经小玻璃漏斗将浆状氧化铝徐徐注人柱中，当氧化铝到达柱底时，打开活塞，让洗脱剂缓缓流出，并不断用手轻轻振动色谱柱，使氧化铝沉降均匀，当柱内液面接近氧化铝柱时，关闭活塞 湿法装柱 取一根直径约1.5cm，长约40cm带玻璃活塞的色谱柱，在柱子的下端填一层松紧合适平整的脱脂棉，将其垂直地固定在铁架台上 干法装柱 取一根直径约1.5cm，长约40cm带玻璃活塞的色谱柱，在柱子的下端填一层松紧合适平整的脱脂棉。通过小漏斗将中性氧化铝粉末徐徐加入柱内，同时轻轻振动层析柱，使柱面均匀平整，然后垂直地固定在铁架台上。 湿法上样： 取50-100mg盐酸小檗碱粗晶，加少量乙醇于水浴上加热溶解，用滴管沿色谱柱管壁小心加入，勿使氧化铝柱面受到振动，开启活塞，当液体表面下降接触到氧化铝柱面时，关闭活塞。用少量乙醇淋洗柱内壁，将沾于管壁周围的样品液轻轻洗人柱面上，至洗净后关闭活塞，准备进行洗脱。 干法上样 取50~100mg盐酸小檗碱粗品，加少量乙醇溶解，然后加入中性氧化铝1.5g，拌匀，挥净溶剂，研磨成松散均匀的粉末，通过小漏斗徐徐加入柱内，同时轻轻振动色谱柱，使柱面均匀平整，再轻轻盖上一层大小合适的滤纸，加入几颗玻璃珠。 洗脱 用滴管吸取乙醇，绕管壁轻轻加入柱内，开启活塞，控制流速20-30滴/min，不断加入乙醇，保持色谱柱内乙醇不低于2-3cm高度，待氧化铝柱上呈现不同颜色的色带时，继续冲洗，使其彼此分离，并收集开始流出的鲜黄色带，此段为盐酸小檗碱，其余色带为其他成分。 注意事项 1.棉花不能太多，太多洗脱时流速太慢，但要注意太少氧化铝漏出来。 2.装柱时柱子要垂直，尽量做到固定相密实均匀无气泡 3.上样时，尽量用少的溶剂溶解样品，沿着层析柱内壁缓慢均匀加入。 4.洗脱时，流速不要太快，注意流分的收集。 鉴定实验（一） 生物碱的一般鉴别反应 取少量精制盐酸小檗碱，用酸水溶解，分成4份，分别滴加以下试剂，观察有无沉淀析出及颜色变化，记录所观察到的现象和反应结果，并根据现象得出结论。 碘化铋钾( Dragendorff )试剂 碘化汞钾( Mayer )试剂 碘化碘钾( Wagner )试剂 硅钨酸( Bertrand )试剂 实验一 黄柏中生物碱的提取分离鉴定 鉴定实验二 特殊鉴别反