09-消毒灭菌的方法.docVIP

消毒灭菌的方法 （一）干热消毒：一般在烤箱中进行，主要用于消毒玻璃器皿。干热消毒后的器皿干燥，易于保存。缺点是干热传导慢，可能有冷空气存留于烤箱内因此要用较高的温度和较长的时才能达到消毒目的，需加温到160℃，保持90~120 min （二）湿热消毒法：湿热消毒是一种有效的消毒方法，一般使用高压蒸汽灭菌器进行消毒。为了保证消毒的效果，消毒物品不应装得太满，以便消毒器内气体流通；导气管要伸至灌底并防止堵塞，在加热升压之前，打开排气阀门，使加热器内的残留冷空气排除。冷空气排完后，关闭排气阀门，开始升压，待达到所需要的压力时，开始记录时间，并控制压力恒定。高压消毒在5、10、15、20磅的压力下进行，持续时间可为10、15、20、30 min。根据不同的物品选择不同压力和时间，一般物品（如布类、金属器械、玻璃器皿等）消毒的要求是15磅20 min，有些常规使用液体要消毒15磅15 min，橡胶用品为10磅10 min，一般认为在这种情况下于 煮沸消毒可用于注射器及某些用具的快速消毒，缺点是湿度太大。 （三）紫外线消毒：紫外线直接照射消毒时目前各实验室常用的方法之一，主要用于实验室房间里的空气、操作台表面及桌椅等消毒。但在房间内安装不能高于2.5m。要使各处达到0.06μw/cm2的能量照射，否则影响消毒效果。也可用紫外线消毒一些塑料培养器皿（如塑料培养皿、塑料培养板）。缺点是消毒有死角。现已有电子灭菌灯可待其紫外线灯进行实验室的空气消毒。 （四）过滤除菌消毒：有很多组织细胞培养液体不能采用高压小的方法进行灭菌处理，如血清、合成培养液、酶及含油蛋白质具有生物活性的液体等，可采用过滤方法以去除细菌等微生物。滤气有抽吸（抽滤）式及加压式两种类型；滤板（或滤膜）结构可为石棉板、玻璃或微孔膜。 微孔滤膜滤器：这种滤器为金属结构，但其中间为一种一次性的特质混合纤维素脂滤膜。可用于包括血清在内的各种培养液体的过滤除菌，速度较快，效果较好，现已为许多实验室所使用。滤膜的规格很多，主要根据滤器的直径大小而划分其型号，可按待过滤液体的量来选择适当的型号。我们实验室滤过较大量培养液多用直径10cm（容器量为500ml）及直径15cm（容量为2000ml）两种规格。用于小量培养液时，可选用2.5cm直径滤器，以注射器推动为压力而过滤。 微孔滤膜滤器可为加压式（正压式）或抽滤式，由于加压式微孔滤滤器过滤效果好、使用方便、易清洗，目前使用最为广泛。 滤膜的选择是效果好坏的关键。常用的滤膜孔径为0.6μm、0.45μm、0.22μm。用以过滤过除菌时，通常使用0.22μm、孔径的滤膜（可有效除去细菌）。由于滤膜较薄且光滑、易移动，滤器的上层和下层的响应部位各设有一凹槽以放置一硅胶垫圈便于固定滤膜。安装滤膜时应注意正确的放置位置；同时应注意滤膜的正反面，（正面即光面应向上）。由于滤膜承受压力有限，滤器不宜按转过紧，以免造成滤膜破裂。在过滤大量液体时通常使用两层滤膜，上层为0.45μm，下层为0.22μm，以确保过滤安全。每次过滤完毕应核实滤膜是否有移动或破裂。 （五）消毒剂及抗菌素 组织细胞培养利工作中也用消毒剂来进行灭菌处理，消毒剂主要是75%酒精、过氧乙酸、乳酸等化学制剂。可分别用于操作人员的皮肤、实验台、器械、器皿等操作表面，实验室的桌、椅、墙壁地面及空气等的处理。如：75%究竟最为常用，用途也最广泛；0.1%新洁尔灭克对器械、皮肤、操作表面进行擦拭和浸泡消毒；乳酸可用于空气消毒；另外尚有各种用于地面消毒的消毒液（例如山花消毒液、过氧乙酸等）可供选用。 抗菌素也常用在组织细胞培养工作用使用，但多数是为了预防。要注意的是不能完全依赖抗菌素来达到消毒灭菌。常用的抗菌素为青霉素及链霉素。 （六）消毒方法的选择 组织细胞培养工作中的消毒灭菌方法如上面所述可有多种，应根据具体情况选择应用适当的方法。 实验室环境的消毒：实验室中空气的消毒，最理想是采用过滤系统与恒温设备结合使用，但价格较昂贵。亦可使用紫外线消毒，但安置紫外线灯时要符合要求，且在工作期间不宜在开启的紫外线灯下操作，另外尚可用乳酸等蒸汽户电子灭菌灯消毒。实验室的地面多用山花消毒液等消毒液或新洁尔灭溶液等处理。桌椅等亦多用消毒剂消毒处理，最常用的是以酒精擦拭，亦可用紫外线照射。 培养器械的消毒：多数培养用的器材常用干热和湿热消毒，干热消毒的方法最为简便，凡高温不致损坏的器皿如玻璃器皿等，可以干热消毒。时热时的蒸汽能较快穿透，热传导较佳，故比干热更有效，对于干热高温会损坏的器材，可采用湿热消毒，如有些器械、液体、橡胶制品、布料等重用高压蒸汽灭菌。有些器械可煮沸消毒，或以消毒剂浸泡；不能耐高温的塑料制品，可用消毒剂浸泡或紫外线照射。 培养用液体的消毒：盐溶液及一些不会因高温破坏其成分的溶液，常采用高压蒸汽消毒。血