RIOK3在食管癌中的表达及对其细胞生物学行为的影响.pdf

目录 摘 要1 Abstract4 前 言8 第一部分 食管癌组织和细胞中RIOK3 的表达情况0 1 材料与方法9 2 结果16 第二部分 RIOK3对食管癌细胞增殖、迁移能力及EMT 相关蛋白的影响20 1 材料与方法20 2 结果23 讨 论28 结 论30 参考文献36 综述：肿瘤EMT 相关蛋白及调控因子研究进展40 攻读学位期间发表文章情况51 附录52 致谢53 个人简历55 新乡医学院硕士学位论文 RIOK3在食管癌中的表达及对其细胞生物学行为的影响 摘 要 背景 食管癌是常见的消化系统恶性肿瘤之一，根据WHO 统计，我国食管癌病死人 数每年约20 万，占世界的一半。肿瘤的转移是食管癌患者预后不良和死亡的主要 原因。RIOK3 是非典型丝/苏氨酸蛋白激酶RIO 激酶 （Right Open Reading Frame Kinase）家族成员之一。RIO 激酶在细胞信号传导和肿瘤的发生和转移中发挥重要 作用。目前发现RIOK3 与乳腺癌、胰腺导管腺癌的发生进展关系密切，而RIOK3 在食管癌的发生发展中的作用尚不十分清楚。 目的 通过生物信息学技术、免疫组织化学（Immunohistochemistry，IHC）、Westernblot 和实时定量聚合酶链式反应 （Real-time quantitative PCR，qRT-PCR）等方法检测 RIOK3在食管癌及癌旁组织和细胞中的表达，细胞功能实验检测RIOK3对食管癌细 胞增殖和迁移能力的影响，并通过Westernblot 方法检测RIOK3 与EMT 相关蛋白之 间的关系。 方法 1.利用Oncomine 和GEO （Gene Expression Omnibus ）数据库，分析食管癌中 RIOK3 的表达情况。 2.运用IHC 方法检测食管癌及癌旁正常食管粘膜组织中RIOK3 的表达情况，并 分析RIOK3 蛋白的表达与临床病理参数的关系。 3.通过qRT-PCR 和Westernblot 技术检测RIOK3mRNA 和蛋白在不同食管癌细 胞株 （NEC、KYSE-150、Eca109 和EC9706细胞）和食管正常上皮细胞 （HEEC）中 的表达情况。 4.利用瞬时质粒转染方法构建过表达和干扰RIOK3 的食管癌细胞株模型，并通 过qRT-PCR 和Westernblot 验证。 5.利用CCK-8、平板克隆实验检测过表达和干扰RIOK3 后食管癌细胞的增殖能 1 新乡医学院硕士学位论文 力，Transwell 实验检测其迁移能力。 6.利用Westernblot 技术检测过表达和干扰RIOK3 后，食管癌细胞中EMT 相关 蛋白的表达情况。 结果 1.Oncomine和 GEO 数据库分析结果显示：相对于正常食管粘膜组织，食管癌组 织的RIOK3mRNA 表达降低。 2.IHC分析结果显示：食管癌组织石蜡样本中65.1%（31/48例）的癌组织中RIOK3 蛋白表达水平明显低于其相配对的癌旁组织；RIOK3 的表达与性别、年龄、肿瘤位 置及淋巴结转移无显著相关性 （P0.05）；在不同分化程度的食管癌组织中RIOK3 表达差异显著，肿瘤分化程度越低，RIOK3 的表达越低。 3.检测RIOK3 在食管癌细胞中的表达结果显示：RIOK3 在Eca109、EC9706 食 管癌细胞中表达明显低于正常食管上皮细胞 （P0.05），而NEC、KYSE-150 细胞表 达与正常食管上皮表达差异不明显。 4.qRT-PCR 和 Western blot 方法检测发现，过表达 RIOK3 的EC9706 细胞 （EC9706.R）和ECa109 细胞 （ECa109.R）与转染空载质粒的EC9706 （EC9706.vec） 和ECa109 （ECa109.vec）相比，RIOK3在mRNA 和蛋白水平明显增高 （P0.05）； 干扰RIOK3 的NEC 细胞（NEC.shR2）和转染