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分离度及影响因素
观察比较
请仔细观察右面的4个色谱分离图,并指出其中哪一个分离效果最佳?说出你的理由。
从色谱图上观察,你认为相邻谱峰分离效果的优劣与哪些因素有关?
问题与讨论
01
问题:如何进行分离条件的选择与优化?
02
讨论(可从下列2个方面入手)
两相邻色谱峰的距离,越大则分离越好;
色谱峰的峰形,越尖锐或对称则分离越好。
03
总结2种情况的核心
基于保留时间的差值;
基于色谱峰的峰宽与对称度。
分离度R
基本色谱分离方程
n
为色谱柱的理论塔板数
α
为相对保留值(即分配系数比或容量因子比),即α=k2/k1
k
为相邻两组分保留时间长的组分的容量因子,即k2
影响分离度的因素
在气相色谱中,柱选择项和柱容量项虽然都与色谱柱的性质相关,但柱选择项主要受色谱柱性质影响,柱容量项主要受柱温左右。
在液相色谱中,柱选择项和柱容量项也都与色谱柱及流动相的性质相关,但柱选择项主要取决于流动相的种类。
改善分离的一般原则
(1)增加柱长
(2)增加固定相的量(k增加,柱容量增加,分离度增加)
(3)选择分离因子较大的色谱条件
(1)提高柱效,减小塔板高度:使用颗粒更细的填料,更小心、均匀地填充色谱柱;
(2)减小色谱系统的死体积:湿法装柱
(3)减小进样量:防止色谱柱超载
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