生物制品技术 灭活剂 （课件）生物制品的灭活剂.pptx

生物技术及应用专业教学资源库生物制品技术 灭活剂一、灭活与灭活剂 制备生物制品，在20世纪初Lowenstein和Eisler（1911）就开始用甲醛减毒制备破伤风类毒素； 1924年Puntoni以0.1％甲醛或0.1％苯酚制成犬瘟热疫苗； 1925年CastaBoyer和Plaudi等用甲醛灭活制备猪丹毒菌苗等。 随后许多学者还试用氯仿、甲苯、胺叶油等灭活剂制牛瘟脏器苗。到了20世纪的30年代，Dorset等用结晶紫制猪瘟疫苗成功。一、灭活与灭活剂 无论选用何种灭活剂，都应注意以较低温度和最低剂量为原则，同时应注意溶液的pH值，以近于中性为宜。 此外 被灭液的浓度如含菌或含蛋白量高，应适当增加灭活剂剂量或适当稀释灭活剂，否则易造成灭活不完全。一、灭活与灭活剂一、灭活与灭活剂Inactivation and Inactivator 凡破坏微生物的生物学活性及血清中补体活性，或破坏病原微生物的繁殖能 力和致病作用，均称之为“灭活”。 适当的灭活剂和灭活方法，对微生物抗原性及免疫原性没有影响（一）、物理学方法灭活加热杀菌超声波裂解细胞射线照射（二）、化学药剂灭活 化学灭活剂的灭活作用，一般是随剂量增大，温度升高，灭活效率递增灭活剂量大小与灭活时间成反比。并且在选用灭活剂时，应以能保证疫苗安全与效力，以低剂量和较低温度短时间处理为好( 三 )、影响灭活剂灭活的因素 1、被灭活物质的种类和特性不同种类的被灭活物质对各种灭活剂的敏感性是不完全一样的。被灭液的浓度如含菌或含蛋白量高，应适当增加灭活剂剂量或适当稀释灭活剂，否则易造成灭活不完全。( 三 )、影响灭活剂灭活的因素2、灭活剂的种类和特性 不同种类的灭活剂适用的灭活范围不同如甲醛适用于多种细菌、病毒和毒素的灭活，但对口蹄疫病毒的灭活效果不理想；而乙烯亚胺对口蹄疫病毒的灭活效果远远优于甲醛。( 三 )、影响灭活剂灭活的因素3、灭活剂的浓度和剂量 灭活的速度和效果在一定范围内与灭活剂的浓度和剂量成正比，浓度和剂量越大，灭活效果越确实，所以灭活时间也越短。 但许多灭活剂都有一定的毒害作用，浓度高，剂量大，反而会破坏抗原性，而且易引起疫苗接种部位的组织损伤，甚至坏死，甲醛即是如此。( 三 )、影响灭活剂灭活的因素4、灭活时间和灭活温度 随灭活时间的延长，灭活效愈加确实，但不是越长越好，如乙烯亚胺灭活结束后就对抗原呈现破坏作用，所以达到灭活时间后及时中止灭活。 灭活的温度一般选择37℃，温度升高可以加快灭活速度。但温度过高对抗原损害严重。 ( 三 )、影响灭活剂灭活的因素5、有机物质对灭活的影响有机物质中主要是蛋白质对灭活有一定的影响，如果杂质蛋白质含量高则对细菌、病毒以及毒素呈一定的保护作用，不利于灭活剂的灭活。 灭活前应采用适当方法如离心、过滤等除去杂蛋白，以提高灭活效果。（四）、常用的化学灭活剂 1、甲醛 是最常用、使用最广泛的灭活剂。 用于制造菌类疫苗和类毒素的灭活，浓度一般为0.1%～0.8%；而用于病毒类疫苗的灭活浓度常为0.05%～0.2%。 疫苗灭活结束时应加入过量的焦亚硫酸钠中止反应。（四）、常用的化学灭活剂2、结晶紫 是一种碱性染料，为甲基紫的纯品。易溶于水和乙醇，溶液为紫色 其灭活作用机制是通过他的阳离子与微生物蛋白质带阴电的羧基形成弱电离化合物，破坏了微生物的正常代谢，扰乱微生物的氧化还原而起灭活作用（四）、常用的化学灭活剂3、苯酚 又称石炭酸，其抗菌作用是通过它在细胞膜上的表面活性作用而损害细菌细胞膜，使胞浆漏出，菌体溶解。 苯酚在0.2%浓度时，抑制一般细菌的生长，1%以上时杀菌，芽孢和病毒对苯酚耐受力很强（四）、常用的化学灭活剂4、烷化剂 这类烷化剂有：二乙烯亚胺（BEI)、N-乙酰乙烯亚胺（AEI）、2-乙基乙烯亚胺（EEI)及缩水甘油醛等。 用乙烯亚胺衍生物对病毒灭活结束时，应中止灭活并除去其残存物，以免继续作用而损害疫苗的免疫原性。去除的方法是加入过量的硫代硫酸钠，并使其最终含量为2%。生物技术及应用专业教学资源库谢谢观看 数十年来，除主要用甲醛灭活剂外，在生产口蹄疫灭活苗过程中，不断选出了新的灭活剂，如1957年Ubetini等报道用β-丙酰内脂；1959年Franklin和Welkei等试用羟胺；1964年Martinsen用缩水甘油醛等。研究灭活生物制品，重要条件是选择适当的灭活剂和灭活方法。 杀死微生物体或消除其毒性。 采用此类灭活方法应注意，加热处理以放水浴间接升温为好；超声波裂解应放冰浴中间断进行；60Co照射处理，应根据被照射物的容量大小选择照射物与钴源的距离和剂量。据试验用l0000mL大玻瓶装6000mL的血清或血液，当吸收60Co量达200万rad/时能完全杀死芽孢杆菌，150万rad/时可使非芽孢菌完全灭活