色谱检测技术及应用 色谱质谱仪联用技术及其必要性 色谱联用技术-LCMS接口系统.ppt

色谱检测技术及应用 7.3 液相色谱-质谱联用技术 LC-MS 一、实现 LC-MS 的困难 1. LC 流动相对MS工作条件的影响 1ml溶剂气化生成 500 -1300ml的蒸气，而质谱仪只能接受10 ml/min气体流量。 有时流动相中含难以挥发的缓冲盐 2. 质谱离子源温度、电离方式不适宜液相色谱所分析的样品。 二、接口系统 1.脱溶剂 2.使被测物电离 1.粒子束接口（Particle-Beam,PB） 根据流体力学原理，利用样品与溶剂动量的不同将它们分开 形成气溶胶→脱溶剂→动量分离 得到的谱图与电子轰击质谱图非常相似，可利用标准谱图检索 现少使用 EI PB 2. 电喷雾电离（ESI，接口+软电离技术） Rayleigh Limit Reached + + + + + + + + + + - - - - - + + + + + + + + + + - - - - - + + + + + + - - + + + + + + - - Evaporation + + Charged Droplets 试样离子 准分子离子 Analyte Ions Solvent Ion Clusters Salts/Ion pairs Neutrals + + + + + + + + - - 其他离子 电喷雾电离，Electrospray 流出液在高电场下形成带电喷雾，在电场力作用下穿过气帘。 气帘的作用：雾化；蒸发溶剂；阻止中性溶剂分子 特点： 是LC- MS的基本配置接口 是一种软电离方式，适合稳定性差、极性大、分子量大的物质的电离。 主要生成准分子离子（[M+H]+ 、[M-H]-、 [M+Na]+等），生物大分析产生多电荷离子。 灵敏度高 不能进行谱库检索 不适用于非极性化合物的分析 对于大分子化合物，电喷雾产生多电荷离子，相对分子质量Mr计算方法如下： 选相邻峰，电荷n， n +1 m1=(Mr + n+1)/ (n+1) m2=(Mr + n)/n 分子量约为12200的细胞色素的 ESI质谱图 3.大气压化学电离 (Atmospheric Pressure Chemical Ionization, APCI) 电离主要生成溶剂离子 样品分子与溶剂离子反应生成离子簇 离子去簇后送到质谱计中 MS 放电针 喷雾 LC 热喷雾(100-120?C)，化学电离;适用于弱极性和热稳定化合物分析. 特点： 化学电离，软电离技术，产生的碎片很少 适用于弱极性、分子量小（2000Da）和热稳定化合物分析 灵敏度高 ESI的补充技术 ESI APCI 硬件 毛细管有几千伏高压 放电针 电离 液滴中的离子蒸发 类似于化学电离 原理 属于液相电离 属于气相电离 应用 * 适合的LC流速为 0.2～2ml/min 0.2～0.3ml/min * 极性和离子化合物 极性较小的化合物 * 可产生多电荷离子 产生单电荷离子