食品快速检测技术（新） 2.环介导等温扩增快检技术（LAMP） 环介导等温扩增技术原理.pptx

环介导等温扩增技术原理 — 1 — 食品营养与检测专业教学资源库 目录页 — 2 — 食品营养与检测专业教学资源库 环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification ,简称LAMP)是利用4个特殊设计的引物和具有链置换活性的Bst DNA聚合酶,在恒温条件下特异、高效、快速地扩增DNA的新技术。 一 概念 食品营养与检测专业教学资源库 LAMP技术扩增基因的关键是设计出4条特异性的引物，从需要扩增的靶序列中选出F3c、F2c、F1c、B1、B2、B3 六个特定的区域 二 引物设计 食品营养与检测专业教学资源库 引物设计 针对靶基因的六个不同的区域，基于靶基因3’ 端的F3c、F2c和Flc区以及5’ 端的Bl、B2和B3区等6个不同的位点设计4种引物。 LAMP反应的开始阶段四条引物都被使用，但在循环阶段则只有内引物被使用。 FIP(Forward Inner Primer)：上游内部引物，由F2区和F1C区域组成，F2区与靶基因3’端的F2c区域互补，F1C区与靶基因5’端的Flc区域序列相同。 食品营养与检测专业教学资源库 引物设计 F3引物：上游外部引物(Forward Outer Primer)，由F3区组成，并与靶基因的F3c区域互补。 BIP引物：下游内部引物(Backward Inner Primer )，由B1C和B2区域组成，B2区与靶基因3’端的B2c区域互补，B1C域与靶基因5’端的Blc区域序列相同。 B3引物：下游外部引物(Backward Outer Primer )，由B3区域组成，和靶基因的B3c区域互补。 食品营养与检测专业教学资源库 LAMP反应引物与对应模板区域 食品营养与检测专业教学资源库 1.基本原理 2.引物设计 3.分步原理 三 基本原理 食品营养与检测专业教学资源库 1.基本原理 60—65℃是双链DNA复性及延伸的中间温度，DNA在65℃左右处于动态平衡状态。利用引物合成的DNA链取代模板互补链。 ①扩增目的片段时依赖的是一种具有链置换特性的Bst DNA聚合酶 ②需四条能够识别靶序列六个特异区域的引物 ③LAMP法并不需要对双链DNA进行预变性及进行温度循环。  食品营养与检测专业教学资源库 1.起始阶段 2.扩增阶段 四 分步原理 食品营养与检测专业教学资源库 （1）内引物FIP的F2与其模板的互补序列F2c结合，在Bst DNA聚合酶作用下，从F2的3’末端开始启动DNA合成，合成一条以FIP为新的DNA单链并与模板链结合形成新的双链DNA。 1.起始阶段 食品营养与检测专业教学资源库 （2）以F3为起始合成的新链与模板链形成双链。而原合成的以FIP为起始的DNA单链被置换而脱离产生一单链DNA，其在5’末端F