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核酸的理化性质
The Physical and Chemical Characters of
Nucleic Acid
一、核酸的酸碱性质及溶解度性质
1. 核酸为多元酸,具有较强的酸性
2. 核酸溶于水,不溶于醇
二、核酸的高分子性质
1. 核酸的粘度:
DNARNA
dsDNA ssDNA
2. 核酸的沉降:
不同分子量、不同分子形状及构象的核酸分子
在超速离心时的沉降的速率有很大差异,这是超速
离心法提取和纯化核酸的理论基础
三、核酸的紫外吸收性质
核酸分子在波长260nm 处有强烈的吸收,是由
组成核酸的碱基的共轭双键所决定的。这一特性常用
作核酸的定性和定量分析
1. 碱基的紫外吸收光谱
2. 核酸紫外吸收的应用
1)用于DNA或RNA的定量
A260 = 1.0 相当于
50μg/ml 双链DNA(dsDNA)
40μg/ml 单链DNA (ssDNA or RNA)
20μg/ml 寡核苷酸
2 )确定样品中核酸的纯度
纯DNA: A260/A280 = 1.8
纯RNA: A260/A280 = 2.0
四、DNA的变性和复性
一)DNA 变性(denaturation) :在某些理化因素
作用下,DNA双链解开成两条单链的过程
二)DNA 变性的本质:双链间氢键的断裂
1. DNA变性的图解
高温或极端pH
协同性的DNA解链
2. 部分变性DNA的电镜图像
3. DNA解链时的紫外吸收变化
*增色效应(hyperchromic effect) :DNA 变性
时其溶液A260增高的现象
4. DNA的解链曲线
解链曲线 :连续加热DNA
的过程中以温度相对于A260
值作图,所得的曲线
解链温度(melting
temperature,Tm) :解链过
程中,A260值的变化达到最
大变化值的一半时所对应的
温度
5. 解链曲线的变化
* DNA链中G+C含量越高,解链温度就越高
二)DNA的复性
1. DNA 复性(renaturation) :当变性条件缓慢地除去后,
两条解离的互补单链可重新配对,恢复原来的双螺
旋结构,这一现象称为DNA复性
2. 退火(annealing) :热变性的DNA经缓慢冷却后即可
复性,这一过程称为退火
3. 减色效应:DNA复性时,其溶液A260 降低的现象
五、核酸分子杂交
1. 核酸分子杂交(hybridization) :不同种类的DNA 单链
分子或RNA分子放在同一溶液中,只要两种单链分子
之间存在着一定程度的碱基配对关系,在适宜的条件
可以在不同的分子间形成杂化双链(heteroduplex),这
种现象称为核酸分子杂交
2. 杂化双链可以在:
不同来
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