第三节 基因及基因表达的定量及定性分析.pdf

第三节 基因及基因表达的定量及定性分析 一、DNA的定性和定量分析 二、RNA的定性和定量分析 2017-11-20 1 一、DNA的定性和定量分析 1. Southern印迹 （Southern blot） 2. 基因组PCR反应 3. 荧光原位杂交 2017-11-20 2 1.Southern印迹 （Southern blot），DNA印迹 原理: 核酸分子杂交的碱基互补配对 用途: 鉴定DNA片段 步骤: DNA分离→DNA变性→转膜→ 杂交→洗 膜→放射 自显影 关键技术: 核酸探针标记和DNA的转移。 2017-11-20 3 2017-11-20 4 是一种利用非放射性的荧光信号对原位 杂交样本进行检测的技术 2017-11-20 5 二、RNA的定性与定量 1.Northern印迹 2.RT-PCR 3.实时PCR 4.RNA酶保护试验 5.芯片技术 2017-11-20 6 1.Northern印迹， RNA印迹 2017-11-20 7 2017-11-20 8 2017-11-20 9 实时PCR的基本原理 2017-11-20 10 原理 利用RNase A和RNase T1能专一性降解单链 RNA而双链RNA受到保护的特性，分析受到保护的 RNA片段的大小，估计待检测mRNA的情况 用途 mRNA定量 mRNA末端定位 mRNA剪切部位 内含子位置的确定 2017-11-20 11 类别 基因组芯片 表达芯片 （cDNA芯片） 测序芯片 用途 表达芯片↘ 定量分析 RNA 测序芯片↗ 2017-11-20 12 基因芯片使用流程