传代细胞培养和病毒感染力滴定.ppt

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2020-07-16 发布于福建
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实验二传代细胞培养和病毒感染力(TcID5o)的滴定尖验目的了解不同传代细胞的形态、传代方法。了解病感染力测定的几种方渎拿握半数綱胞培养物感染量TCID50的操作步隳、计算方法及合义。二、材料 1.96孔细胞培养板、加枰淼(200u)、枪头、 Eppendor管(1.5m) 2.BHK21细胞 3.培养液:含5%犊牛血请、200U/ml青、燄零素的DMEM 4.伪狂犬病病毒漩(PRV) 三、传代细胞糸培养方法取长满单层的细胞一瓶,倾去培养液加入12ml胰酶消化液,于37℃培养箱放置几分钟至细胞间出现空隙或细胞变圆后,倒去消化液加入生长液,反复吹打几次,使细胞分散成单个细胞,然后分装于23个小瓶中。再在每个小瓶中补充生长液至10ml,然后置37℃培养箱培养,培养1-2天即可长成单层。病毒在细胞中的培养选长满单层的细胞,倒掉培养液加入适量的病毒悬液置温箱中感作〔吸附)45min-h。取出瓶子,倒掉或不倒掉病毒液,补足维持液,置温箱中继续培养,直至细胞病变收毒:将病变的细胞置于20℃冰箱中,冻结后取出自然解冻,在解冻过程中要振摇几次,以使细胞完全从瓶壁上脱落。然后将病毒液收集于盐水瓶或其它容器中。低温贮藏备用。