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一、说明:
《生化分离技术实验》教学大纲
《生化分离技术》 是生物技术专业的必修课, 是一门研究生化物质的各种分离纯化技术
的专业课, 是生物工程学科的重要组成部分, 该课程是本专业学生必须掌握的一门课程。 通过实验使学生能掌握生化分离中重要分离技术的原理和方法。
(一)教学目的和要求:
1、在本实验课程中培养和提高学生运用生物分离技术的原理的能力。
2、掌握生物分离技术的基本方法和技能,培养学生正确记录实验数据和现象、正确处理实验数据和分析实验结果的能力。
3、培养学生严谨认真、实事求是的科学态度和良好的实验作风。
4、在教学中,教师要向学生讲明该实验课的性质、任务,并使学生明确实验课的地位和作用,提高学生学习的主动性。
5、学生实验前,必须预习实验内容,了解每个实验的目的、原理和方法。
6、实验过程中,要求学生操作要规范、做好实验原始记录、爱惜仪器、节约药品、遵守安全制度、使学生养成良好的实验习惯,树立良好的学风。
7、要求学生实验后按时完成实验报告。
(二)教学重点和难点
本课程教学重点为沉淀方法原理和适用性; 膜分离机理的两种模型, 常用的浓差极化和膜污染的特征解决方法; 溶剂萃取法的分配定律的灵活运用; 离子交换法机理;吸附法;色层分离原理和适用范围;常用的色层分离技术理论;结晶技术理论等。
本课程教学难点为 1. 各种生化分离方法的原理; 2. 生化分离技术在生产及科研实践中
的应用。
(三)教学方法和改革措施
通过本课程的课堂讲授与课外自学;
内容求精求新,以培养兴趣、增长知识、鼓励创新为目的,以阐明基本原理和研究设
计思路为重点, 结合实例简单介绍基本工艺, 不断补充该学科最新进展。 重点章节发放英文研究论文资料,鼓励学生自学讨论。
(四)总学时
12 学时
(五)学分
1 学分
(六)开课学期
三年级上学期
二、大纲内容和学时分配
(一)教学内容
一、实验学时: 2
实验一 盐析沉淀
二、实验目的:( 1)掌握研析的原理与方法;( 2)利用盐析法分离不同蛋白质(本实验中分离球蛋白与清蛋白)。
三、实验内容: 盐析法分离蛋清中的球蛋白和清蛋白;
四、实验要求: ( 1)掌握盐析的原理与方法;( 2)学习设计分离不同蛋白的实验步骤。五、实验所需仪器设备
仪器类:试管,烧杯,量筒,玻棒,离心机,天平,牛角匙,电炉,铁架台等。
化学试剂类: 1. 蛋白质溶液: 5%卵清蛋白溶液或鸡蛋清水溶液(新鲜鸡蛋清:水 =1: 9);
硫酸铵。
实验二 去细胞壁的枯草芽孢杆菌液体培养
一、实验学时: 2 学时
二、实验目的: ( 1)了解无菌操作的要求;( 2)学会细菌接种、培养方法;( 3)学会用氨苄青霉素或溶菌酶去革兰氏阳性菌细胞壁的方法。
三、实验内容: 枯草芽孢杆菌液体培养,氨苄青霉素或溶菌酶去细胞壁。
四、实验要求: ( 1)了解无菌操作的要求( 2)学会细菌接种方法( 3)学会用氨苄青霉素或溶菌酶去革兰氏阳性菌细胞壁的方法。
五、实验所需材料及仪器设备:
实验仪器及耗材:接种针,接种环,酒精灯或煤气灯,消毒酒精棉球,镊子,试管架,标签纸,培养箱( 37℃)电子天平, pH 计,微波炉,超净工作台
实验材料:( 1)菌种:枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis)
(2)培养基试剂:葡萄糖(或蔗糖),蛋白胨,氯化钠,牛肉膏,琼脂,氨苄青霉素,溶菌酶。
实验三 选择变性剂沉淀法去除 DNA中的蛋白质杂质一、实验学时: 2 学时
二、实验目的: 1. 了解酚氯仿法破碎细胞的原理。
了解酚氯仿法去除 DNA中的杂蛋白的原理。
学习 DNA的纯化技术。
三、实验内容: 酚氯仿破碎细胞,酚氯仿去除杂蛋白, DNA的纯化。
四、实验要求: 掌握酚氯仿破碎细胞的原理和技术, 掌握酚氯仿异戊醇去除杂蛋白的原理与方法,掌握选择变性沉淀的原理,了解 DNA纯化的基本技术。
五、实验所需材料及仪器设备:
活材料:枯草芽孢杆菌( Bacillus.subtilis )
培养基:牛肉膏蛋白胨培养基(牛肉膏,蛋白胨, NaCl,琼脂)。
试剂:苯酚,氯仿,异戊醇,乙醇
实验用品:三角瓶,接种环,酒精灯,试管,接种针,离心机等。
实验四 凝胶色谱法分离甘油三酯
一、实验学时: 4
二、实验目的: 通过从粗油中分离甘油三酯, 学习运用凝胶色谱法分离油脂中各个成分的方法。
三、实验内容:吸附色谱是利用吸附剂对被分离物质的吸附能力不同,用溶剂或气体洗脱,
以使组分分离。 常用的吸附剂有氧化铝、 硅胶、聚酰胺等有吸附活性的物质。硅胶色谱频繁 使用在脂质中的单一脂质, 糖脂质以及磷脂质的分离。 各种脂质被硅胶吸附, 随着洗脱溶液的极性增加,各种极性不同的化合物被分离出来。
四、实验要求: ( 1)了解从粗油中分离甘油三酯的方法; ( 2
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