实验六多倍体的诱发与鉴定.ppt

实验六：多倍体的诱发与鉴定 杨细燕 华中农业大学 遗传教研室 一、实验目的 掌握多倍体人工诱发的原理，了解人工诱变的方法。 掌握多倍体鉴定的方法。 二、实验材料 实验材料：蚕豆（2n=2X=12）经染色体加倍处理后的根尖。 三、实验用品 试剂：卡宝品红染色剂，0.1%秋水仙素，卡诺固定液，1Mol/L HCI 仪器及器具：显微镜、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片等 四、实验原理 多倍体广泛地存在于植物界，目前已知被子植物中有三分之一以上的物种是多倍体。 其产生途径除自然发生外，也可采用高温、嫁接和射线处理等物理方法和化学药剂处理方法而获得多倍体植株，其中应用最广泛、效果最好的是秋水仙素化学诱导法。 秋水仙素是由百合科植物秋水仙(Colchicum　autumnale L.)中提炼出来的一种生物碱，对植物的种子、幼芽、嫩枝等可产生诱变作用。 其作用机理是：阻止微管的聚合作用，从而抑制细胞分裂时纺锤体的形成，使复制后的染色体不能拉向两极，使染色体停滞在分裂中期，但细胞不分裂，不能形成两个子细胞，从而导致染色体加倍，形成多倍体细胞，在此基础上进一步发育成多倍体植物。 鉴定多倍体可分直接法和间接法 直接法：是将经过秋水仙素溶液处理的根尖、茎尖进行染色体计数，多倍体植株的染色体是加倍的。 间接法:除了检查染色体数目变化外，形态特征的变异也是一个重要方面。多倍体植物的气孔、花器、花粉粒、种子、果实等部分明显变大，气孔数目减少而密度变稀，同源多倍体育性有一定的降低，所以同源多倍体中有部分畸形的不育花粉粒。这些常作为染色体数目加倍的辅助性指标。 加倍后的蚕豆根尖明显变大 多倍体植物的气孔增大 1.紫苏二倍体种子 2-6.紫苏多倍体种子 经秋水仙素处理后的蚕豆根尖细胞染色体 经秋水仙素处理后的洋葱根尖细胞染色体 五、实验方法与步骤 ①材料培养：将蚕豆种子洗净，浸种24hr，待种子吸胀后置于培养皿中，放在25℃温箱中发芽。 ②加倍处理：当根长约0.5cm时，滴加0.1%秋水仙素浸根处理24-36hr，待根尖明显膨大后，将秋水仙素冲洗干净，切取根尖用卡诺固定液固定2-24hr，再换70%乙醇，置4℃冰箱保存备用。 ③酸解：用吸水纸将乙醇吸干，加1Mol/L HCI，置60℃水浴锅中水解15min后，将HCI倒掉，用水洗3次，置水中备用。 ④涂片：切取根尖分生区部分，置载玻片上，用镊子将根尖夹成糊状并涂成薄层，待水分干燥后，加1滴卡宝品红染色液，加盖玻片，染色5min。 ⑤压片：用吸水纸包住盖玻片的位置，左手将盖玻片固定，右手拿解剖针或镊子敲打盖玻片，最后用大拇指垂直向下压片。 ⑥显微观察：先在10×镜下调好焦距，找到染色体分散的细胞后，再换40 ×镜下观察统计染色体数目。 六、实验结果 绘一个分散良好的加倍蚕豆细胞染色体图，并注明倍性。 简述秋水仙素诱发多倍体的原理。 提前打开65度水浴锅 * * * （注：如果更太大，可将根尖纵剖成若干份，每次取一份涂片）， 提前打开65度水浴锅 * * * （注：如果更太大，可将根尖纵剖成若干份，每次取一份涂片），