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实验五 植物细胞液泡系与
细胞骨架的染色与观察;一、相关概念与原理
1 植物细胞与动物细胞区别
植物细胞：细胞壁、叶绿体、大液泡
动物细胞：中心体
2 细胞骨架
指真核细胞中的蛋白纤维网架体系，是由微管、微丝和中间纤维组成的体系。
功能：维持细胞的一定形态；细胞内物质运输和细胞器的移动；帮助细胞运动；指导细胞壁合成等 。;3 细胞骨架染色
用Triton X-100处理细胞，抽提掉细胞质内结合在膜结构上的蛋白质，而骨架蛋白得以保存。
戊二醛???定，蛋白质的特异性染料考马斯亮蓝染色后，可以在光学显微镜下观察到细胞骨架的网状结构。
4 液泡系染色
中性红是一种弱碱性 pH 指示剂，pH6.4～8.0时，由红变黄。
中性或弱碱性环境中，植物的活细胞能大量吸收中性红到液泡中；液泡在一般情况下呈酸性反应，因此，中性红便解离出大量阳离子而呈现樱桃红色。
细胞核与细胞质不着色。;实验材料
绿豆芽 洋葱
试剂
Ringer溶液、 M－缓冲液、磷酸缓冲液（PBS）、 1%Triton X-100、 10%中性红溶液 、 0.2%考马斯亮蓝R250、3%戊二醛
器材
显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀片、解剖盘、载玻片、凹面载玻片、盖玻片、表面皿、吸管（1根/人）、牙签、吸水纸;;（1）撕取洋葱鳞叶内表皮1片，约1cm2，置于1.5mL离心管中。
（2）用磷酸盐缓冲液（PBS）浸泡片刻。
（3）吸去PBS，用1% Triton X-100处理20min，抽提细胞骨架以外的蛋白质，增加细胞膜的通透性。
（4）吸去Triton X-100，用M-缓冲液洗3次，每次3min。M-缓冲液有稳定细胞骨架的作用。
（5）用3%戊二醛固定15～20 min。
（6）用PBS洗3次，每次3 min。
（7）考马斯亮蓝染色15 min。
（8）蒸馏水洗2次
（9）置于载玻片上，盖上盖玻片，在光学显微镜下观察。 ;五、实验结果;2 洋葱表皮细胞细胞骨架的观察;作 业
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