第五版精子形态解读.ppt

《WHO人精液实验室检查及处理手册》（第5版）精子形态学部分解读 浙江省人类精子库 姚康寿 主任医师 背景 全球精液检测标准化的需求，WHO制定了人类精液实验室操作手册，用于临床实验室和科研。 正常形态精子： 通过观察来自女性生殖道，特别是经性交后宫颈粘液或从卵子透明带表面回收的精子有助于定义具备潜在受精能力的精子。 使用这些标准，对所有男性而言，其正常形态精子百分率的范围大致为0-30%，很少超过25% 。 这个低数据自然产生一个低的临界值 （仅为3-5%）。 经过“透明带选择”的精子，正常形态率仍然低，约8-25%。 WHO不同版本精子形态学内容比较 精子形态学分析包括以下步骤 精液涂片的制备 固定和染色 封片 精子形态评估（应制备双份涂片重复评估，每张涂片应评估至少200个精子） 。 双份片评估（百分率）结果比较（差异是否在可接受范围内，如果不可接受，重新读片） 。 取平均值，报告结果 精液涂片的制备 充分混匀精液样本。 快速取样，避免精子从混悬的精液样本中沉降。 重复取样前，再次混匀精液样本。 根据精液样本具体不同情况，采用不同的涂片方式。 （a） 对于未稀释的精液，采用拉薄技术，将一滴精液（S）沿成角的载玻片背侧边缘展开，向前拖拉制成涂片。 （b） 对于洗涤的精液，采用滴管法，水平持滴管（P）推进，将一滴精子悬液（SS），沿载玻片的表面展开。 正常精液标本 使用拉薄技术，取一滴精液在载玻片的表面上涂片。 磨砂载玻片的两面，用不起毛软纸擦干净。 用HB或No.2铅笔，在载玻片的磨砂处标记上身份编号、日期。 根据精子密度，取5-10μl的精液滴在载玻片的一端。用第二张载玻片作为拉片，沿着载玻片的表面拖拉精液滴。 涂片经空气干燥后，立即固定、染色。 一开始，可以用10μl的精液，45°角度，一秒钟的时间涂片。 为了减少涂片上精子间的相互重叠，如果需要，可以改变上述参数（10μl，45°，1秒）。 精液的粘稠度越低，涂片的拉薄技术发挥得越好，拉薄技术不适用于高度粘稠的精液。 精子密度低的标本 假如精子密度低于2×106/ml，浓缩标本 粘稠精液标本 精浆高度粘稠时涂片往往是厚而不均，可以按与液化不良精液标本相同的处理方法或者使用洗涤的方法处理。 染色方法 推荐的染色方法有 Papanicolaou染色法 Shorr染色法 Diff-Quik染色法。 改良巴氏染色步骤 1、80%乙醇 30秒 2、50%乙醇 30秒 3、纯水 30秒 4、Harris苏木精 4分钟 5、纯水 30秒 6、酸性乙醇 4—8次* 7、流水洗 5分钟 8、50%乙醇 30秒 9、80%乙醇 30秒 主要溶液的作用 乙醇 固定细胞；并且使细胞脱水 苏木精 使细胞核染成蓝色 酸性乙醇 去除胞浆中非特定区域的染料 （脱色） 自来水 去除未与细胞核结合的苏木精 橙黄G-6 使胞浆染成粉红色 EA-50 使胞浆染成粉红色 WHO第4版与第5版巴氏染色主要步骤比较 1、第5版共19步，第4版共23步，减少了4个步骤。 2、由于苏木精后没有流水冲洗，导致染液残留较多，酸性乙醇的更换频率明显增加。 3、第5版染色所需时间较4版约增加10分钟以上。 4、染色效果相似。 WHO第4版与第5版染色效果比较 Shorr染色步骤 1、流水 浸12-15次* 2、苏木精 1-2分钟 3、流水 浸12-15次* 4、乙醇胺 浸10次* 5、流水 浸12-15次 6、50%乙醇 5分钟 7、Shorr溶液 3-5分钟 8、50%乙醇 5分钟 9、75%乙醇 5分钟 10、95%乙醇 5分钟 精子形态的快速染色程序 1、快速染液1 10秒 2、快速染液2 5秒 3、流水 浸10