体内药物分析样品前处理(final).ppt

基质效应结果比较，液-液萃取 vs. 固相萃取（HLB, MCX） * 六.LC/MS/MS BA 方法需注意的问题 同位素标记内标 vs. 结构类似物内标 同位素标记内标与待测化合物的物理化学性质极为相似，可有效补偿/消除基质效应或者样品前处理过程中的误差； 结构类似物内标的物理化学行为无法跟待测物完全保持一致，在测定过程中产生的基质效应可能无法完全和待测物统一，有可能对数据的准确性造成影响； 采取结构类似物内标的方法，有的问题直到样品分析过程中才会暴露出来，比如内标响应在未知样品中与在标准曲线/质控样品中差距较大，必须严密监视。 * 六.LC/MS/MS BA 方法需注意的问题 采用结构类似物作为内标的某方法，优化前的内标响应趋势图 * 六.LC/MS/MS BA 方法需注意的问题 Shimadzu LC-20AD system, API4000 MS/MS; Agilent Eclipse Plus C18 (5μm, 2.1×50mm) MPA: 0.1% AA in water MPB: 100% ACN Time (min) %A %B Flow Rate 0.40 65.0 30.0 350 μL/min 1.00 50.0 50.0 350 μL/min 2.50 50.0 50.0 350 μL/min 2.60 5.0 95.0 350 μL/min 3.00 5.0 95.0? 350 μL/min 3.10 90.0 10.0 350 μL/min 3.30 90.0 10.0 350 μL/min 3.40 5.0 95.0 350 μL/min 3.60 5.0 95.0 350 μL/min 3.70 65.0 30.0 350 μL/min 4.50 65.0 30.0 350 μL/min 优化方法后的内标响应趋势图 * 六.LC/MS/MS BA 方法需注意的问题 Waters UPLC Acquity UPLC, API4000 MS/MS; Acquity UPLC BEH C18 (1.7μm, 2.1×50mm) MPA: 0.1% AA in water MPB: 100% ACN Time (min) %A %B Flow Rate 0.30 70.0 30.0 400 μL/min 2.50 55.0 45.0 400 μL/min 2.51 5.0 95.0 400 μL/min 3.20 5.0 95.0 400 μL/min 3.21 70.0 30.0? 400 μL/min 4.00 70.0 30.0 400 μL/min 非特异性吸附（Non-Specific Binding, NSB） 在低蛋白含量的生物基质（尿液，脑脊液，透析液等）中，化合物在存放/转移过程中与容器材料发生非特异性结合的现象； 在相应的生物基质或水中测试，做转管实验； 通常更换储存容器材料，或在基质中加入一定量表面活性剂可消除NSB现象。 * 六.LC/MS/MS BA 方法需注意的问题 * ? 0.2ng/mL ABC123 in water ? 0.2ng/mL ABC123 in water with 20 μl of 1% Triton X-100 ? Original value Binding test ? Original value Binding test Peak area 1.94E+04 1.67E+04 2.33E+04 2.45E+04 1.88E+04 1.71E+04 2.16E+04 2.39E+04 1.95E+04 1.65E+04 ? 2.39E+04 2.17E+04 Average peak area 1.92E+04 1.68E+04 2.29E+04 2.34E+04 Bias -12.8% ? ? 1.9% ? 六.LC/MS/MS BA 方法需注意的问题 某化合物水溶液，在聚丙烯管中转管三次后的NSB测试结果，加入表面活性剂之后再做相同测试的结果如下表。 * 主要参考书籍资料 Principles and Practice of Bioanalysis, Edited by Richard F. Venn, Taylor Francis, 2000. Handbook of LC-MS Bioanalysis—Best Practices, Experimental Protocols, and Regulations, Wenkui Li, Jie Zhang, Franci