讲座课件 酸还原酶活性的测定讲座课件.ppt

硝酸还原酶活性的测定 小组成员：麻弘媛 张翠敏 穆昕阳 苏鑫 李金婷 发言人：苏鑫 一、实验原理与过程 实验原理 实验流程 标准曲线制作 二、实验现象与结果 现象： 用打孔器处理叶片后得到大小均一的叶片，叶片暗反应后看到1号对照瓶内叶片边缘发黄，而2和3号瓶内相对较绿;测吸光值时可以看到实验组比标准曲线组颜色浅的多。 此图为标准曲线显色反应 实验数据： 540nm下的OD值: 用2、3号管溶液OD平均值减去1号管溶液的OD值，得到的值在标准曲线上查出相应的NaNO2含量（μg）。 结果与计算 把在标准曲线上查得的NaNO2含量代入下式，计算硝酸还原酶活性： 将上述结果带入公式测得硝酸还原酶活性为2.60856。 三、查阅文献与结果分析 实验数据存在较大误差，其原因总结如下： 1.可能培养方式为水培，氮吸收与土培可能不同，一般来说，氮吸收量越多，说明酶活力越强。 2.材料不新鲜，导致酶活力降低。 3.实验操作不当所致。 4.抽真空时间不够，反应不充分。 5.抽真空后没马上进行暗反应。 6.OD值读数误差。 四、试验操作技能 1.在加液研磨实验材料时分次的添加冲洗研钵和研磨棒。 2.经离心后的样品上清须转移至试管中再进行吸取。 3.在测定样品OD值时所采用的对照试剂不同，标准曲线与Y轴的交点也不同。 4.称量纸折叠至四边上翘，以防药品腐蚀天平。 5.试管夹夹在试管中上部，从试管 底部套入、取出，拇指不要按在试管 夹的短柄上。 6.在滴定时加液要慢， 边加边震荡使之充分反应。 五、操作中存在的不足 1.待测样品研磨不充分导致的实验误差。 2.操作人员不同导致加入药品量的细微不同导致的实验误差。 3.不同人员对于颜色的辨别度不同导致的实验误差。 4.药品配制后放置时间过长部分变质导致的实验误差。 5.水浴加热时间不准确导致的实验误差。 六、提高准确度的方法 1.将样品剪碎充分研磨，尤其是叶片部分。 2.由同一人加入同系列药品。 3.让对颜色敏感的人辨别颜色的变化。 4.易变质药品现用现配，其他药品用完后盖好盖子。 5.水浴加热时利用秒表定好时间。 七、小组团队合作分工 一：李金婷 二：张翠敏，张翠敏 三：苏鑫 四——七：麻弘媛 汇总：麻弘媛 恶意放狗：麻弘媛 ヾ(o???)?ヾ 前方图文并茂请注意！ 1 2 3 试剂 1 2 3 4 5 亚硝酸钠标准液ml 0.2 0.4 0.6 0.8 1 蒸馏水ml 0.8 0.6 0.4 0.2 0 1%对氨基苯磺酸ml 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 0.2%ɑ-萘胺ml 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 亚硝酸纳含量μg 1 2 3 4 5 酶反应和酶活性的测定 取油菜叶洗干擦干 用打孔机打孔 分成三份/1g 分别放入50ml三角瓶 加入试剂 用针管进行抽气 30℃暗室保温30min 终止反应 分别取1ml上清加入对2ml氨基苯磺酸和2mlɑ-萘胺 室温显色20min 540nm波长下测定OD值 结果分析