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· 技术方法 ·
复合型阴离子交换层析填料 Capt oa dhere 纯化工艺的优化
张波 1,靳征 1,徐秀玲 1,鲍禹凡 1,李景华 2
1. 沈阳三生制药有限责任公司,辽宁 沈阳 110027;2. GE 生命科学部,辽宁 沈阳 110003
摘要: 目的 优化复合型阴离子交换层析填料 Capto adhere 的纯化工艺,并进行验证。方法 利用中心复合设计
(central composite design,CCD)法对影响复合阴离子交换层析的 3 个因素(上样液 pH 值、上样液电导率值、上样量) 进行优化,拟合出响应曲面,找出最优参数范围。将优化的 Capto adhere 层析工艺与亲和层析相结合,纯化 CHO 细胞 表达的 IgG1 单抗培养液,验证工艺参数的稳定性。结果 优化的 Capto adhere 层析工艺为:上样液 pH 值 6. 9,上样液 电导值率 6. 3 mS / cm,上样量 300 mg / ml gel;CHO 细胞表达的 IgG1 单抗培养液先经蛋白 A 亲和层析柱初步纯化, 再经优化的 Capto adhere 层析工艺进一步纯化后,样品纯度达 98. 9%,蛋白 A 残留量为 0. 000 52%,宿主细胞蛋白 残留量为 0. 015%,与预测值比较,结果偏差小于 10%,且均符合质控标准,两步层析总收率达 86. 7%。结论 优化了 复合型阴离子交换层析填料 Capto adhere 的纯化工艺,利用亲和层析与 Capto adhere 复合阴离子交换层析两步法纯 化单抗是有效、简便、可行的。
关键词: 单克隆抗体;纯化;复合型层析填料;优化
中图分类号: O635 文献标识码: A 文章编号:1004-5503(2014)05-0720-05
DOI:10.13200/ki.cjb.000352
Optimization of process of multimodal anion exchange chromatography for purification using Capto adhere as media
ZHANG Bo*,JIN Zheng,XU Xiu-ling,BAO Yu-fan,LI Jing-hua
*Shenyang Sunshine Pharmaceutical Co.,Ltd.,Shenyang 110027,Liaoning Province,China Corresponding author: ZHANG Bo,E-mail: cnzhangbo@163.com
Abstract: Objective To optimize and verify the process of multimodal anion exchange chromatography for purification using Capto adhere as media. Methods The three factors influencing multimodal anion exchange chromatography were optimized by central composite design(CCD) method,based on which the response surface was fitted,and the scope of optimum parameters was found out. The IgG1 monoclonal antibody culture liquid expressed in CHO cells were purified by the optimized Capto adhere chromatography process combined with affinity chromatography to verify the stability of technological parameters. Results The optimal pH value,conductance rate and loading of samples were 6. 9,6. 3 mS / cm and 300 mg / ml gel respectively. The purity of IgG1 monoclonal antibody culture liquid expressed in CHO cells,after preliminar
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